剧透-冲洗,冲洗,冲洗!看哪里需要特别注意流动相流路径。
本周,我将用一些提示来结束我们关于HIC的系列文章,以保持您的HIC方法顺利运行。这篇文章的另一个标题很简单,“冲洗!”正如我的同事安迪和桑迪普所解释的,在HIC流动相中有大量的盐,避免HIC问题的关键是勤奋地冲洗和避免盐沉淀。
今天我要讨论的所有内容中最重要的部分是:始终确保将列存储在适当的解决方案中!对于安捷伦Adv188bet博金宝官方网站anceBio HIC色谱柱,我们建议不要将色谱柱存储在高盐流动相中。对于隔夜储存,建议用低盐缓冲液冲洗色谱柱。为了长期储存,必须将盐冲洗出来,将其储存在100%乙腈中。当您从高盐缓冲液切换到乙腈时,您需要用水或低浓度缓冲液进行中间冲洗,以避免盐沉淀。还要注意背压,因为高粘度流动相会导致更高的压力。列用户指南对此进行了更详细的描述。每个供应商都会为他们的专栏推荐稍微不同的存储条件-所以最好总是检查用户指南。
接下来,让我们看看如何在快速入门指南中为我们的新HIC专栏配置您的移动阶段:
流动相A:低盐流动相
流动相B:高盐流动相
流动相C:异丙醇或储存液流动相
D:水
你会注意到的第一件事是,这是为四元泵配置的。如果您使用的是带有两对通道的二元泵,则需要将水放在通道B2上进行冲洗。我们有意在HIC色谱柱的所有指南和应用说明中将水列为流动相D,以强调冲洗色谱柱和LC堆栈的重要性。在高盐条件下,切勿让仪器或色谱柱闲置。养成在工作列表或序列结束时用水冲洗LC堆栈的习惯。色谱柱可在低盐条件下短期储存(即流动相A),但长期储存建议使用100%乙腈。
养成的下一个习惯是定期检查溶剂流动路径是否有泄漏。这对于所有类型的色谱都是一个好习惯,但对于高盐方法尤其关键。如图1所示,即使是2 M盐的小泄漏也会很快被盐覆盖。
图1。咸的一塌糊涂
大多数较新的LC型号都有集成在软件和硬件中的清洗工具,包括泵的密封清洗和自动采样针的针清洗。两者都用。至少,这种密封清洗应该是水,理想的是含有10%异丙醇的水,以防止微生物生长。图2显示了如果没有针洗,最终可能会出现的混乱局面。
图2。一个难以清理的咸咸的烂摊子
今天我给你的最后一个建议是关于更精细的细节,所以请耐心听我说。如果你用的是异丙醇(或任何有机溶剂),查看每种溶剂的完整排列,比如当你指定哪条线有哪个流动相时。通常,当这些线到达搅拌器时,一些会被安排在其他的上面——所以如果顶部的线滴水或泄漏,它会掉到下面的线上。如果上面的线有高盐流动相,那么下面的线应该是水相而不是有机的,因此避免盐沉淀的风险。如果下面这条线是水,盐就会回落到水溶液中溶解。我们大多数人都根深蒂固地认为流动相A是水相B是有机相,我们打破了这个常规因为A和B都是水相。只要仔细检查你的高盐线输入搅拌机的地方,如果在它下面有一条线,确保它不含有机溶剂。图3显示了这些线条在安捷伦1260 Infinity II生物惰性LC上的排列方式,我们希望避免在A线188bet博金宝官方网站或D线中使用有机溶剂。
图3。安捷伦1260无限生物惰性LC上的溶剂线排列。188bet博金宝官方网站
以上就是我今天想和大家分享的内容。只要记住1。适当地存储你的列,2。3.检查泄漏情况。冲洗,冲洗,冲洗,4。注意盐在有机溶剂中的位置。
当我们在安捷伦开始这个项目时,疏水相互作用色谱法对我来说是新的。188bet博金宝官方网站有质谱分析的背景,盐的用量让我大吃一惊!我从格雷格、安迪和桑迪普身上学到了很多,希望你们也从他们身上学到了一些东西。
一会儿聊!——安妮
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