糖基化的重要性
许多生物药物是糖基化的蛋白质,由培养物中的活细胞系统制造。它们包括单克隆抗体(mAb),融合蛋白,生长因子,细胞因子,治疗酶和激素。收获蛋白的翻译后糖基化可保护其免受体内降解,并且已证明对产品溶解度,稳定性,药代动力学和药效学(PK/PD),生物活性和安全性至关重要。
重要的是要注意,蛋白质糖基化是一个多方面的过程,在该过程中,聚糖将自己附着在具有氮或含氧侧链的特定类型的氨基酸上。蛋白质N-糖基化始于培养细胞的内质网,并将所得的聚糖链转运到高尔基体,并通过一系列聚糖加工酶对其进行修饰和修剪。相比之下,蛋白O-聚糖生物合成直接在高尔基体中启动,前体进行衍生化。
另外,糖基化可以受到不同宿主细胞和特定培养条件的性质的影响:例如,培养基类型,pH,温度和搅拌水平。
鉴于这种复杂的背景,准确分析的需求很明显。已经建立了一系列分析选择,以研究完整的蛋白质,糖肽,释放的聚糖和单糖。在此光谱中,敏捷的色谱和质谱溶液组合用于生成188bet博金宝官方网站结构信息,MAP肽和剖面聚糖。
端到端工作流程
当今生物制药行业的口号是效率和经济。因此,在聚糖分析的情况下,科学家重视消除瓶颈并消除可变性的工作流程。聚糖分析中使用的三个阶段是所有分析方法共有的(样本制备,分离/检测和分析),并且Agilent已采取了重要步骤来推进这三种。188bet博金宝官方网站
成功的聚糖分析的三个步骤
步骤1:样品准备。糖基化可以在蛋白质和肽水平上均显示出来。但是,此过程是复杂的,只有在去除蛋白质或肽主链时,才可以清楚地了解碳水化合物本身。需要健壮和高精度样品准备,以确保您的结果清晰,可靠且可重复。为此,您需要自动化工具,例如安捷伦188bet博金宝官方网站AssayMap Bravo,样本准备平台。该平台具有几个关键功能,可以支持用于LC/MS分析的高质量样品的生产。自动化复杂的样品制备工作流和精确的流量控制可最大程度地减少人为错误的任何潜力。
步骤2:分离和检测技术。聚糖的主要结构是由组成的单糖和糖苷链和非糖取代基的位置定义的。分析的目的通常是在一系列已知结构之间确定未知结构。但是,对于鲜为人知的生物体的聚糖,更难预测和表征它们。完整质量和释放的聚糖分析的技术继续前进,并且是安捷伦的特定重点领域。188bet博金宝官方网站
这188bet博金宝官方网站Agilent 1290 Infinity II UHPLC系统,以及AdvanceBio LC列188bet博金宝官方网站的安捷伦组合(特别是PLRP-S1000Å,使您能够执行不同类型的完整分析,包括没有消化,减少和IDE。这188bet博金宝官方网站Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF系统具有新掺入的大分子群自动点特征,以改善完整蛋白质的分析。大分子群自动调谐显示出比标准系统自动调谐高4倍的灵敏度。现在,该设备还包括一个脆弱的离子自动调谐,以防止不稳定分子(例如甘氨酸)的不良碎片化。释放的聚糖可以在色谱上与188bet博金宝官方网站Agilent AdvanceBio Glycan映射列,提供超高分辨率和出色的分析灵敏度。
步骤3:结果分析。分析实验室需要高度优化的软件工具 - 可以帮助它们在短时间内具有挑战性重组抗体的特征。188bet博金宝官方网站Agilent Masshunter Bioconfirm软件具有三个主要的生物制药工作流:完整的mAb,肽映射和释放的聚糖分析。该软件可以迅速将LC/MS数据转化为可操作的输出。该软件的最新版本(B.09.00)包括用于相对定量糖型的工具。
对于已发布的Glycan工作流程,Glycans的安捷伦个人化合物数据库和库188bet博金宝官方网站(PCDL)提供准确的聚糖识别和确认。
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