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如何进行化验

前

成功化验所需的程序、技术和资源

本学习中心旨在向您介绍海马XF检测工作流程，重点介绍程序和技术，以确保最佳的XF检测性能和结果。当您阅读每个部分时，程序涉及使用安捷伦海马XF188bet博金宝官方网站实时ATP率测定细胞能量表型测试执行初始细胞特征。所描述的技术适用于所有海马XF分析，如播种贴壁细胞，加载注射端口等。只有所需的消耗品将根据您的XF分析仪型号和XF检测试剂盒有所不同。使用下拉菜单选择您的XF分析仪，然后单击下面的部分以显示XF分析工作流的该步骤的相关内容。

选择要显示内容的步骤

1.收集XF化验材料

2.准备XF试验

3.建立你的XF实验

4.运行XF测试

5.分析XF测定结果

6.超越基础

1.收集XF检测材料

本节列出了建立XF试验所需的材料。

1.1所需安捷伦材料188bet博金宝官方网站

1.2其他所需材料

1.1所需安捷伦材料188bet博金宝官方网站

相关支援资料

参考资料

海马工具包

1.2其他所需材料

其他材料

  • 37°C non-CO2孵化器
  • 细胞计数器/血细胞计数器
  • 37°C水浴
  • 蒸馏或无菌H2O
  • 倒置布莱特菲尔德显微镜
  • 触摸涡
  • 15和50毫升锥形管
  • P200, P1000, 8和/或12通道P200移液管
  • P200, P1000, 8通道P200移液管
  • 试剂水库

推荐材料

  • 带细胞培养板适配器的离心机(如果使用悬浮细胞类型则需要)
  • 微型离心机
  • 校准pH计*
  • 搅拌板*
  • 无菌过滤瓶(0.22 μm过滤器)和盖*
  • 1.0 N NaOH溶液*

(*如果使用的检测介质不是Seahorse XF DMEM pH 7.4或Seahorse XF RPMI pH 7.4，则需要这些项目)

相关支援资料

参考资料

海马工具包

的信息海马

更换仪器类型

2.准备XF试验

本节重点介绍XF试验前一天的准备技术，包括选择细胞播种密度的指导，在XF组织培养板上播种粘附细胞的技术和XF容器的水化技术。

本节重点介绍测定前一天的准备技术，包括选择细胞播种密度的指导，在XFp组织培养板上播种粘附细胞的技术和水化XFp容器的技术。

选择一个工作流步骤以显示帮助内容。

2.1选择播种密度

2.2种子细胞

2.3水合物筒

2.3水合物筒

2.4设计实验

2.1选择播种密度

选择细胞播种密度的基本程序

使用您的安捷伦海马，有效地检测新陈代谢和生物能量功能188bet博金宝官方网站细胞外通量分析仪，分析仪,在基础呼吸和最大呼吸(OCR)和细胞外酸化(ECAR)作用下，必须首先描述特定细胞类型的代谢活性。海马XF实时ATP速率检测试剂盒海马XFp实时ATP速率检测试剂盒可以用来表征感兴趣的细胞系/类型一次试验。两个简短的测试。

最佳细胞播种数因细胞类型而异，但通常介于两者之间5 × 103.4 x 104每孔为贴壁细胞。悬浮细胞需要更高的播种密度，从5 × 104到2 x 105每个孔的细胞取决于细胞类型。1 × 1048 x 104每孔细胞。一般来说，导致50-90%合流的密度在仪器的理想/动态范围内产生代谢率。

请查阅188bet博金宝官方网站安捷伦细胞分析出版物数据库和/或出版物数据库为特定于您的需要的单元密度值提供一个初始起点。

海马工具包

选择细胞播种密度的基本程序

为了使用安捷伦海马细胞外通量分析仪有效地检测代谢和生物能量功能，必须首先描述特定细胞类型在基础和最大呼吸(OCR)和细胞外酸化(ECAR)下188bet博金宝官方网站的代谢活性。海马细胞能量表型测试试剂盒可用于在两个简短的测定中表征感兴趣的细胞系/类型

最佳的细胞播种数量因细胞类型而异，但通常在1 x 10之间48 x 104每孔细胞。一般来说，导致50-90%合流的密度在仪器的理想/动态范围内产生代谢率。

请查阅海马细胞参考数据库和/或出版物数据库为特定于您的需要的单元密度值提供一个初始起点。

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参考资料

2.2种子细胞

播种贴壁细胞的基本程序(通常在XF前一天进行pHS迷你分析)

对于每一种被测试的密度，按照粘附细胞的指示进行播种。查看播种悬浮单元的说明。

188bet博金宝官方网站安捷伦海马XFpHS迷你分析是在安捷伦海马中进行的188bet博金宝官方网站96年好24-well8-wellXFpHS迷你细胞培养微型板块Miniplate连同XFe96传感器盒。本程序描述了与安捷伦海马分析仪一起使用的播种粘附细胞类型的建议。188bet博金宝官方网站查看播种悬浮单元的说明。

建议使用XF96细胞培养板、XFe96滤筒和Seahorse XF实时ATP速率检测试剂盒进行初始检测。

建议使用两个细胞培养板，两个细胞盒和带有仪器的XF细胞能量表型测试试剂盒进行初始分析，以测试四种不同的细胞密度和四种不同的FCCP浓度。

建议使用XF24细胞培养微皿、XFe24传感器盒和海马XF实时ATP速率检测试剂盒进行初始检测。

一种测试2-4个不同细胞密度的方法，使用XFp细胞培养迷你板，XFp cartridge和Seahorse XF Real-Time ATP rate assay kitXFp仪器XF HS迷你分析仪建议用于初始测定。

这是建议的XF96检测板图，用于播种四种细胞密度:

分析板图xf96

用于细胞密度滴定试验的播种

这是播种四种细胞密度的建议检测板图:

板块图XF24
板图设计XFe24

用于FCCP浓度滴定试验的播种

如果您已经进行了细胞播种密度试验和/或知道每孔的最佳细胞数，则FCCP滴定试验可以使用在除背景校正孔外的所有孔中播种的最佳细胞数(1.0 X细胞/孔)进行。否则，按照如下所示的细胞播种和药筒水化/制备的相同说明，并使用以下建议的平板布局测试四种浓度的FCCP:

板图设计XF24

有两种工作流程可供选择:(1)对于不受数量限制的细胞，可以以不同密度播种多个XFp细胞培养迷你板，以减少实验间隔时间，更快地完成表征工作流程(加速工作流程)。(2)对于数量有限的细胞，在第一次实验结果确定后，再制备额外的细胞(标准工作流程)。

实验 基本原理 加速工作流程 标准工作流程
将单个或不同密度的细胞播种，并直观地评估细胞融合程度;为下一步选择一个迷你板。 为了在仪器的动态范围内产生代谢率，细胞应达到50-90%合流。视觉评估是最佳细胞密度的良好近似，并将在每次试验中验证。 根据下图，以2-4种不同密度播种1-2个迷你板。 以单细胞密度播种1个迷你板;水合1 XFp墨盒。
平板地图XFp
  • 根据上面描述的标准或加速工作流程，选择2-4个单元密度进行测试。要么覆盖上述参考文献中发现的范围，要么播种推荐的细胞/孔值(1X)加上0.5X, 2X和4X每个孔的细胞。
  • 从蓝盒子里拿出三包迷你版。
  • 从将要使用的浴盆上拆下箔封。
  • 在细胞培养孔周围的护城河中加入无菌水或PBS。使用8通道移液器，浓度设置为200 μL，将护城河的两侧填满(每个腔室可装两个移液头)。如果没有多道移液管，请在护城河的每个腔室中注入400 μL无菌水或PBS(共3200 μL)。
  • 在A孔和h孔中只加80 μL生长培养基(不加细胞)，为本底校正孔。
  • 收获并重新悬浮到所需的最终浓度，并在80 μL生长培养基中播种。最佳的细胞播种数量差异很大，但通常在5×10之间3.- 4×104每孔细胞，必须凭经验确定。(例如，1 × 104每孔细胞，重悬细胞1 × 104每80 μL = 1.25 × 105每毫升细胞)
海马工具包

播种贴壁细胞的基本程序(通常在XF试验前一天进行)

  • 当播种安捷伦海马XF24细胞培养微板时，建议采用两步播种过程。188bet博金宝官方网站这两步过程产生了一致且均匀的单层细胞。
  • 收获并重新悬浮到所需的最终浓度，并在80 μL生长培养基中播种。最佳的细胞播种数量差异很大，但通常在5 × 10之间3.- 4 × 104每孔细胞，必须凭经验确定。(例如，1 × 104每孔细胞，重悬细胞1 × 104每80 μL = 1.25 × 105每毫升细胞)
  • 收获并重新悬浮到所需的最终浓度，并在100 μL生长培养基中播种。最佳的细胞播种数量差异很大，但通常在1×10之间4- 8×104每孔细胞，必须凭经验确定。(例如，对于2 x 104每孔细胞，重悬细胞2 × 104每100 μL = 2.0 × 105每毫升细胞)
  • 每孔种子80 μL细胞悬液;不要在背景校正孔(A1, A12, H1, H12)中播种细胞。确保在背景校正井中只放置介质(没有单元格)。
  • 在B - G孔中每孔注入80 μL细胞悬液，在背景校正孔(A和H)中不注入细胞，在背景校正孔中只注入培养基(不注入细胞)。
  • 每孔种子100 μL细胞悬液;不要在背景校正孔中播种细胞(A1, B4, C3, D6)。确保在背景校正井中只放置介质(没有单元格)。
  • 重要提示:让培养皿在室温组织培养罩中静置一小时。1这可以促进均匀的细胞分布，并减少某些细胞类型的边缘效应。使用显微镜监测依从性。
  • 将平板放在标准的细胞培养箱中，让细胞粘附。对于粘附性较强的细胞，这通常需要大约1小时，但对于粘附性较差的细胞类型，可能需要5-6小时。使用显微镜监测依从性。
  • 休息一小时后，检查细胞粘附情况。
  • 如果细胞粘附良好，在每个孔中再添加150 μL细胞生长培养基(总共250 μL)，然后将平板转移到标准细胞培养箱中。
  • 如果细胞是不将细胞充分粘附在培养皿上，再等待1-5小时使细胞牢固附着(在生物安全柜中)，然后向每个孔中再添加150µL的生长培养基(总共250µL)，将培养皿转移到标准细胞培养箱中。
  • 待细胞粘附后，在每孔中加入150 μl生长培养基，使孔中培养基的总体积达到250 μl。在向孔中添加培养基时，要缓慢地向两侧添加，以免干扰新附着的细胞。
  • 让细胞在细胞培养箱中生长一夜。用显微镜观察细胞的生长和健康状况。

1王志强，王志强，王志强，等。一种基于细胞分析的边缘效应检测方法。生物生物筛选杂志，2003 10月;8(5):566-7

播种悬浮细胞的基本程序(通常在XF当天执行pHX迷你分析)

使用XF技术分析非贴壁细胞(如T细胞、白血病细胞系等)需要将细胞固定在井底。这是通过在每个孔底部涂上聚d -赖氨酸(PDL)或Cell-Tak来实现的。188bet博金宝官方网站安捷伦提供即用的pdl涂层XFe96 / XF96XFp细胞培养微板。它们被验证并推荐用于XF T细胞激活试验中的T细胞。即将使用的PDL板在37°C非co中预热2用于播种细胞前孵育过夜(最少6小时)。

播种悬浮细胞通常在XF试验当天进行，点击查看播种悬浮单元的说明．

如果需要Cell-Tak涂层，则准备Cell-Tak涂层XFe96 / XF96XFp细胞培养板如下所示:

  • 安捷伦海马细胞培养的最佳Cell- tak溶液浓度188bet博金宝官方网站微型板块Miniplate为22.4 μg/mL。
  • 准备2.5毫升1.5毫升0.25毫升该溶液的每一个板，每次化验。请参考制造商的协议来准备该解决方案。
  • 应用2550在室温下，将μL溶液注入每孔20分钟。
  • 每孔用200 μL无菌水清洗两次。
  • Cell- tak - coating海马细胞培养微型板块Miniplates可在4°C下保存长达1周。
  • Cell- tak包被细胞培养微型板块Miniplates在细胞播种前，必须让微培养板在罩内加热至室温。

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参考资料

2.3水合物筒

给药筒补水的基本程序

XF的一个重要组成部分pHS迷你检测平台是传感器盒。传感器盒的每个探针尖端都装有固态传感器材料，可检测pH值和O值的变化2浓度随时间的变化来计算速率。为了使传感器正常工作，它们必须充分补水。

XF的前一天pHS迷你分析:

  • 将至少20毫升的XF校准剂倒入50毫升的锥形管中。把这个放在非co中237°C培养箱过夜。
  • 将至少5毫升的XF校准剂倒入15毫升的锥形管中。把这个放在非co中237°C培养箱过夜。
  • 打开细胞外通量检测试剂盒，去除内容物。
  • 从绿色盒子里拿三包墨盒。从将要使用的浴盆上拆下箔封。
  • 将传感器盒倒置放置在公用板旁边。
  • 分离实用板和传感器墨盒，并将传感器墨盒倒置旁边的实用板。
  • 用200 μL无菌组织培养级水填充实用板的每个孔。
  • 在每个小孔周围的护城河中注入400 μ L。
  • 将传感器插盒下放到公用板上，将传感器浸入水中。
  • 确认水位足够高，使传感器处于水下。
  • 放置在非co中237°C培养箱过夜。为防止水分蒸发，请确保培养箱已适当加湿。
  • 打开安捷伦海马通量188bet博金宝官方网站检测试剂盒，取出内容物。
  • 放置传感器滤芯上下颠倒的就在实用牌旁边。
  • 用1ml的XF校准剂填充实用板的每个孔。
  • 将水力助推器放在公用板的顶部。
  • 降低传感器盒通过Hydro Booster板上的开口，进入Utility板，将传感器淹没在XF Calibrant中。
  • 将传感器插盒下放到公用板上，将传感器浸入水中。
  • 验证XF Calibrant水平足够高，以保持传感器淹没。
  • 放置在非co中237°C培养箱过夜。为防止XF校准器蒸发，培养箱应加湿。
  • 重要提示:在将传感器盒放入安捷伦海马分析仪之前，必须拆卸液压助推器。188bet博金宝官方网站如果不这样做，可能会导致传感器盒和分析仪的损坏。有关进一步说明，请参阅第3节。

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参考资料

2.4设计实验

Wave桌面软件允许您轻松创建和自定义分析模板文件运行在海马分析仪上。

什么是分析模板文件?把分析模板文件看作是你在实验笔记本上设计的实验的电子副本。在您的分析模板文件中输入的信息作为您的实验记录存储在结果文件中，您或其他合作者可以共享和重新运行该文件，在分析完成后为您的结果数据提供结构和组织，并在需要时提供有价值的故障排除信息。

分析模板文件的3个元素是:

  1. 组定义
  2. 板图
  3. 仪器协议

组定义

  1. Open Wave 2.6软件
  2. 点击模板(位于Wave Home下方)
  3. 打开被调用的分析模板实时ATP速率测定
  4. 在组定义视图中，您将看到注射策略、预处理、检测介质和细胞类型的预填充信息。
  5. 双击环境激素而且删除控制和实验条目。
XF96模板选择
XF24模板选择
XFp模板选择图标
  1. 双击细胞类型而且删除默认条目名为Cells(参见188bet博金宝官方网站安捷伦细胞分析出版物数据库）.
  2. 在细胞类型组定义，单击细胞类型而且添加若要添加一个新的细胞类型条目，并输入您打算在分析中分析的细胞类型的名称。建议在组名中添加播种密度。例如C2C12细胞类型每孔播种密度为2万个细胞的命名为:20k C2C12

    为每个Cell Type定义重复3次。

    注意:由于XFe24分析仪的24孔微孔板格式，该细胞播种密度优化协议可以使用1个细胞板和4个细胞播种密度(每组n=5)进行。由于XFe96分析仪的96孔微孔板格式，该细胞播种密度优化协议可以使用1个细胞板和4个细胞播种密度(每组n=22-24)进行。由于分析仪的8孔微型板格式，该细胞播种密度优化方案必须使用两个细胞板，每个板2个细胞播种密度(每组n=3)。在设计您的分析模板时，您可以:
    • 为第三和第四组细胞播种密度创建一个新的检测模板。
    • 将4个细胞播种密度组添加到一个分析模板中，并在执行第一个细胞播种密度组1和2的测试后，将第3和第4个细胞组重新分配到板图中。
    • 在使用细胞播种密度组1和2执行第一次试验后，重命名此模板中的组。
组定义XFe96
组定义XFe24
XFp组定义崩溃
  1. 完成组的命名后，单击生成组Wave将自动创建4个独特的分析组。注意，组名包括单元类型和播种密度，用于简化板图分配。
    下一步是为板块映射分配组。

板图

  1. 点击板图在功能带中(在“化验导航”下)。
  2. 将第一个细胞播种密度组分配给平板地图。要为板块地图分配一个组，首先在组列表中单击组名，然后:
    • 单击列标题(即1,2,3等)或行标题(即A, B, C等)
    • 使用鼠标左键点击在板块地图上拖放一个井的区域。
    • 点击板块地图上的单个井。
  3. 重复下一个细胞播种密度组。建议的板块地图布局如图所示。
板图XFe96
细胞密度XFe96
XFe24板图崩溃
XFp板图崩溃
板图XFe24
平板地图XFp

仪器协议

  1. 点击仪器协议在功能带(在“检测导航”下)中查看或编辑仪器协议。

    注意:默认的仪器协议不需要修改，但是您可以更改协议命令的名称、注入前后的测量次数或执行每次测量的时间长度。
仪器协议XFe96
仪器协议XFe24
仪表协议XFp
  1. 最后,单击运行试验在功能带(在“化验导航”下)中添加额外的实验细节，保存模板文件，并开始细胞播种密度优化化验。
  2. 点击运行试验在功能带(在“化验导航”下)中添加额外的实验细节并保存模板文件。
  3. 中将分析模板文件传输到XFp分析仪，步骤如下XFp细胞外助熔剂用户指南进行第一次细胞播种密度优化试验。
  4. 将分析模板文件传输到XF HS迷你分析仪，步骤请参见XF HS迷你细胞外助熔剂用户指南进行第一次细胞播种密度优化试验。
XFe96审查和运行
XFe24检查和运行
XFp审查和运行

相关支援资料

海马工具包

的信息海马

更换仪器类型

3.建立你的XF实验

本节重点介绍XF当天执行的技术p化验，包括化验介质制备。播种非贴壁细胞，加载XFp传感器墨盒端口与解决方案注入。

选择一个工作流步骤以显示帮助内容。

3.1准备墨盒和介质

3.2洗涤池

3.3组装注射溶液

3.4负载解决方案

3.1准备墨盒和介质

准备墨盒

  • 从培养箱上拆下校准器和装配好的传感器盒的锥形管。
  • 将传感器盒倒置放置在公用板旁边。
  • 从公用板中取出并丢弃水。
  • 在实用板的每个孔中注入200 μL预热过的XF Calibrant。
  • 在每个孔周围的护城河中注入400 μL XF Calibrant。
  • 将传感器盒下放到公用板上，将传感器淹没在校准剂中。
  • 将组装好的传感器盒和实用板放在非co中237°C培养箱45 - 60分钟，然后加载传感器盒的注入端口。
  • 从培养箱上拆下装有液压助力器和实用板的组装传感器盒。
  • 将传感器盒倒置放置在公用板旁边。
  • 拆卸并丢弃液压助推器。
  • 将传感器盒下放到公用板上，将传感器淹没在校准剂中。
  • 将组装好的传感器盒和实用板返回到非co237°C培养箱，直到需要加载传感器盒的注入端口。

让装配好的传感器盒和公用板在非co中孵育237°C培养箱，直到需要加载传感器盒的注入端口。

海马工具包

制备XF检测培养基

海马实验需要特定的介质来精确、一致地测量代谢活动的功能。

188bet博金宝官方网站安捷伦提供即用的低缓冲培养基，预调pH值为7.4，配合兼容的补充物，可以简化分析准备并提供一致的分析条件。查看订购信息在这个现成的XF分析介质系统或下载媒体选择指南．

或者，研究人员可以配制与所使用的检测试剂盒相匹配的培养基。所有组合物都可以使用安捷伦Seahorse XF介质之一制备，并根据具体的测定设计添加不同的底物/缓188bet博金宝官方网站冲液，下面的例子是海马XF实时ATP速率测定细胞能量表型测试．

准备以下XF检测培养基与海马XF实时ATP速率检测试剂盒一起使用。

研究人员应配制与所使用的检测试剂盒相匹配的XF检测培养基。所有组合物都可以使用安捷伦Seahorse XF介质之一制备，并根据具体的测定设计添加不同的底物/缓188bet博金宝官方网站冲液，下面的例子是海马XF实时ATP速率检测试剂盒细胞能量表型测试．

准备以下XF检测介质用于细胞能量表型测试。

188bet博金宝官方网站安捷伦试剂/安捷伦部件编号 最终浓度 体积
海马XF DMEM介质，pH 7.4a、b/ 103575-100或
海马XF RPMI介质，pH 7.4a、b/ 103576 - 100		 XF碱性介质(不含酚红)a、b/ 103335-100或
XF RPMI(无酚红)a、b/ 103336 - 100		 XF碱性介质(不含酚红)a、b/ 103575-100或
XF RPMI(无酚红)a、b/ 103576 - 100		 - 97.0毫升 9.70毫升
海马XF葡萄糖(1.0 M溶液)/ 103577-100 10毫米 10μL 1.0毫升 100μL
Seahorse XF丙酮酸盐(100 mM溶液)/ 103578-100 1毫米 1.0毫升 100μL
Seahorse XF l -谷氨酰胺(200 mM溶液)/ 103579-100 2毫米 1.0毫升 100μL
一个XF DMEM和RPMI Medium, pH 7.4有一个预先调整的pH值，在添加XF补充剂时不需要调整pH值。参见下面的制备方法。海马XF DMEM介质pH 7.4和RPMI介质pH 7.4不兼容XF24分析仪。
b使用替代类型的XF介质制备使用替代类型的XF介质制备使用替代类型的XF介质制备使用替代类型的XF介质制备使用替代类型的XF介质制备．

制备XF DMEM介质pH 7.4或XF RPMI介质pH 7.4的基本程序

制备XF碱性介质(不含酚红)或XF RPMI(不含酚红)的基本程序

设备要求:

  • 37°C水浴
  • 校准pH计
  • 搅拌盘
  • 无菌过滤瓶(0.22 μm过滤器)和瓶盖
  • 1.0 N NaOH溶液

188bet博金宝官方网站安捷伦海马XF DMEM介质pH值7.4和XF RPMI介质pH值7.4旨在提供:

  • 方便:当使用安捷伦海马XF补充剂时，不需要调整最终pH值。188bet博金宝官方网站
  • 一致性:低浓度HEPES缓冲液(5 mM, DMEM;1mm, RPMI)提供更一致的XF数据。
  • 定量:使用具有固定缓冲容量的测定介质可以定量测量质子流出率(PER)。
  1. 将适当体积的XF DMEM Medium pH7.4或XF RPMI Medium pH7.4加热至37°C，置于无菌瓶中。通常是100毫升足够一个盘子。
  2. 将适当体积的XF Base Medium(不含酚红)或XF RPMI(不含酚红)在无菌瓶中加热至37℃。一般情况下，100ml足够一个XF24板。
  3. 添加适量的海马XF补充剂(XF葡萄糖溶液，XF丙酮酸溶液和XF l -谷氨酰胺溶液)如上表所示。
  4. 用1n NaOH将培养基pH值调整为7.4。注意:加入NaOH后pH值变化很快，要小体积慢慢加入调整pH值。
  5. 用0.2 μm过滤器对检测介质进行消毒。
  6. 在37°C孵育最终的XF检测培养基，直到可以使用为止

相关支援资料

参考资料

3.2洗涤池

清洗粘附细胞的基本程序

贴壁细胞至少在XF前一天播种pHS迷你分析:

  • 提取细胞培养物迷你来自CO的板2孵化器。
  • 在显微镜下观察细胞:
    1. 确认细胞健康、形态、播种均匀性和纯度(无污染)。
    2. 确保细胞粘附，具有一致的单层。
    3. 确保背景校正井中没有细胞。
  • 清洗粘附细胞用完整的检测介质:一次使用XF实时ATP速率检测介质:
    1. 从每孔中除去20 μL的培养基。剩下的少量培养基是为了防止细胞变干。
    2. 轻轻加入200 μL检测培养基。
    3. 将平板置于37°C无CO的培养箱中2试验前1小时。
    1. 从每孔中除去50 μL的培养基。剩下的少量培养基是为了防止细胞变干。
    2. 轻轻加入1mL检测培养基。
    3. 将平板置于37°C无CO的培养箱中2试验前1小时。
    4. 重复步骤b，除去50 μL(如步骤a)。
    5. 在24孔平台仪器中加入450 μL测定介质(总容积为500 μL)。
    6. 在开始实验之前，再次清洗细胞用XF Real-Time ATP Rate Assay介质:除去除50 μL外的所有介质，并在500 μL的最终体积中加入新鲜介质。在显微镜下检查细胞，以确保细胞没有受到干扰或被冲走。
  • 在开始实验之前，再次清洗细胞用XF Real-Time ATP Rate Assay培养基:除去所有培养基，只保留20 μL，并加入新鲜培养基至最终体积180 μL。在显微镜下检查细胞，以确保细胞没有受到干扰或被冲走。
  • 在显微镜下观察分析孔，以确保细胞没有被冲走。
  • 将培养皿放入37°C的培养箱中没有公司2试验前1小时。

播种悬浮细胞的基本程序

悬浮细胞的最佳细胞密度取决于细胞的大小。一般来说，最佳的细胞播种密度应导致细胞分布在70-90%合流的单分子层。强烈建议在显微镜下检查细胞分布，以寻找(1)细胞之间有足够的空间，以确保所有细胞均匀地接触涂层表面，(2)确保最小的细胞簇。如果播种的细胞数量超过最佳密度，或者细胞聚集在一起，则会导致细胞粘附性差，并导致不准确的速率测量。

单元格图像A
A:图中为最佳细胞密度的低端，理想播种密度和分布。
细胞图像B
B:图中为最佳播种密度的高端，可以看到一些细胞簇。
  • 对于一个海马细胞培养微孔板，将适量的细胞悬浮液从生长容器转移到锥形管中。
  • 为了计算所需的总细胞数，将Seahorse XFe96每孔所需的细胞数乘以100井。(例如，每孔15万细胞× 100孔= 1.5 × 107细胞)。
  • 为了计算所需的细胞总数，将Seahorse的所需细胞数乘以10口井。(例如，每孔15万个细胞× 10孔= 1.5 × 106细胞)。
  • 室温200 × g离心5分钟。
  • 当细胞被离心时，将50 μL的测定培养基移液管注入预热的pdl涂层海马XF96细胞培养微板或Cell- tak涂层海马XF96细胞培养板的背景孔/对照孔中。
  • 当细胞被离心时，将50 μL的测定介质移液至预热的pdl包被海马XFp细胞培养微板或Cell- tak包被海马XFp细胞培养微板的背景/校正孔(A和H)。
  • 从离心的锥形管中除去上清液。
  • 将细胞重悬于加热的测定培养基中，每孔50 μL的测定培养基中达到所需的细胞浓度。(例如1.5 × 105每孔需要细胞，在1.5 × 10的体积中重新悬挂细胞5/50 μL或3.0 × 106细胞/毫升)。
  • 将离心机设置改为零制动。
  • 将细胞悬浮液从锥形管转移到无菌组织培养库或移液管中。
  • 除背景孔/对照孔外，沿每孔一侧吸50 μL细胞悬液。建议使用多通道移液器。
  • 将迷你板放在XFp托盘中，以300 x g的速度离心1分钟，不要刹车。该载体设计为容纳多达3个微型板，并适合标准的离心微板适配器。确保离心机转子适当平衡。
  • 离心后，肉眼确认细胞粘附在孔底。
  • 以200 × g离心(零制动)1分钟。确保离心机适当平衡。
  • 注意不要干扰底部的细胞，轻轻地向每个孔中加入130 μL测定培养基，达到所需的初始测定量(起始测定量为180 μL)。
  • 在细胞培养孔周围的护城河中加入无菌水或PBS，每室100 μL。使用8通道移液器(如果有)，将其设置为50 μL，每个腔室使用两个头填充护城河两侧。如果没有多通道移液管，请在护城河的每个腔室分别注入100 μL无菌水或PBS(共800 μL)。
  • 将板转移到37°C的培养箱中，不添加CO225-30分钟，以确保细胞完全附着。目视确认大部分细胞稳定地粘附在培养表面。
  • 缓慢而温和地沿着每个孔的一侧加入130 μL温检测培养基。注意不要打扰细胞。
  • 在显微镜下观察细胞，检查细胞是否脱落。
  • 将细胞板放回培养箱15-25分钟。
  • 15-25分钟后，细胞板准备好进行试验。为获得最佳效果，离心后的总时间不应超过1小时。
  • 对于一个海马XF24细胞培养微孔板，将适当体积的细胞悬液从生长容器转移到锥形管中。
  • 为了计算所需的电池总数，Seahorse XF24将每口井所需的电池数量乘以25口井。(例如，每孔15万细胞× 25孔= 3.75 × 106细胞)。
  • 室温200 × g离心5分钟。
  • 当细胞被离心时，将100 μL检测培养基移液管注入室温Cell- tak涂层海马XF24细胞培养板的背景孔/对照孔中。
  • 从离心的锥形管中除去上清液。
  • 将细胞重悬在加热的实验培养基中，每孔100 uL的实验培养基中达到所需的细胞浓度。(例如1.5 × 105每孔需要细胞，在1.5 × 10的体积中重新悬挂细胞5细胞/100 μL或1.5 × 106细胞/毫升)。
  • 将离心机设置改为零制动。
  • 将细胞悬浮液从锥形管转移到无菌组织培养库或移液管中。
  • 除背景孔/对照孔外，沿每孔一侧吸100 μL细胞悬液。188bet博金宝官方网站安捷伦建议使用多通道移液管。
  • 以200 × g离心(零制动)1分钟。确保离心机适当平衡。对于XFp分析仪用户，安捷伦建议使用安捷伦海马X188bet博金宝官方网站Fp载体托盘来离心海马XFp细胞培养迷你板。有关更多详细信息，请参阅基本程序:在XFp细胞培养迷你板中播种悬浮细胞。
  • 将板转移到37°C的培养箱中，不添加CO225-30分钟，以确保细胞完全附着。目视确认大部分细胞稳定地粘附在培养表面。
  • 缓慢而温和地沿着每个孔的一侧加入400 μL温检测培养基。注意不要打扰细胞。
  • 在显微镜下观察细胞，检查细胞是否脱落。
  • 将细胞板放回培养箱15-25分钟。
  • 15-25分钟后，细胞板准备好进行试验。为获得最佳效果，离心后的总时间不应超过1小时。

相关支援资料

参考资料

3.3组装注射溶液

安捷伦海马分析仪的一个关键特点是它能够在检188bet博金宝官方网站测过程中注入试剂，并实时查看结果。这是通过在仪器中放置之前将溶液加载到墨盒内的注入器端口来完成的。

如果使用细胞能量表型分析进行细胞密度和/或FCCP滴定的初始细胞表征，请按照下表所述准备注射溶液。

如果使用Seahorse XFp Real-Time ATP速率测定进行细胞密度的初始细胞表征，请按照下表所述制备注射溶液。

如果使用Seahorse XF Real-Time ATP速率测定进行细胞密度的初始细胞特征，请按照下表所述制备注射溶液。

细胞密度滴定分析溶液组件

FCCP浓度滴定分析溶液组件

  • 从Seahorse Seahorse XF实时ATP速率检测试剂盒盒中取出一个袋子，并取出两个管(Oligo和鱼藤酮+抗霉素A)。
  • 从海马XF细胞能量表型测试试剂盒盒中取出一个袋，并取出两个管(Oligo和FCCP)。
  • 使用移液管，用准备好的检测介质按下表所示的体积重悬每个试管的内容物。在试管上盖上盖子，旋涡1分钟使化合物溶解。
海马XF实时ATP速率检测试剂盒的再悬浮量
复合 XF测定介质的体积 存货集中度
寡霉素 420µl 168µl 150µM 75µM
鱼藤酮+抗霉素A 540µl 216µl 50µM 25µM
用于XF细胞能量表型检测试剂盒的再悬浮体积
细胞能量表型测试组件 XF检测介质体积(μL) 最终库存浓度(μM)
寡霉素 630 One hundred.
FCCP 720 One hundred.
  • 将适当体积的XF检测培养基与原液寡霉素和鱼藤酮/抗霉素A混合，按下表所示制备各注射液3.0 mL。
  • 使用15 mL锥形管，将适当体积的XF检测介质、原液寡霉素和原液FCCP混合，制备3.0mL注射溶液，如下表所示。
  • 将适当体积的XF检测培养基与原液寡霉素和鱼藤酮/抗霉素A混合，按下表所示制备每种注射液300 μ L。
XF实时ATP速率测定试剂盒的稀释体积-细胞特征
港口及小区 股票数量 测定介质体积 10倍(港口) (完井)
A港寡霉素 300µl 60µl 2700µl 240µl 15µM 1.5µM
鱼藤酮+抗霉素A 300µl 60µl 2700µl 240µl 5µM 0.5µM
XF细胞能量表型检测试剂盒的稀释体积-细胞播种密度滴定用XFe24/XF24
井中FCCP的最终浓度 检测介质体积(μL) 库存寡霉素体积(μM) 库存FCCP量(μL) 10X最终低聚(端口)浓度(μM) 10X最终FCCP(端口)浓度(μM)
０．２５ 875 One hundred. 25 10 2.5
0．5 850 One hundred. 50 10 5.0
1.0 800 One hundred. One hundred. 10 10
2．0 700 One hundred. 200 10 20.

如果执行不同类型的XFpHS迷你化验时，咨询适当的XFpHS迷你适当注射溶液制备说明的试剂盒用户指南。

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参考资料

3.4负载解决方案

如果使用Seahorse XF实时ATP速率测定进行初始细胞表征(细胞密度测定)，请按照说明和下表加载枪管注射端口。

如果使用细胞能量表型分析进行初始细胞表征(细胞密度和FCCP浓度滴定试验)，请按照说明和下表加载墨盒注射端口。

注意，对于这些分析设计，只有A和B注入端口将被使用。

传感器插盒注射端口布局

  • 从非co中取出水化的墨盒2孵化器。
  • 定位安捷伦海马XF化验188bet博金宝官方网站药筒。将行标签(字母A-H)放到左边。三角形缺口将在左下角。
  • 定位安捷伦海马XF化验188bet博金宝官方网站药筒。将行标签(字母A-D)放到左边。三角形缺口将在左下角。
  • 定位安捷伦海马XFp检188bet博金宝官方网站测试剂盒。将well标签(字母A-H)放在左边。三角形缺口将在左下角。
  • 使用100 μL或200 μL(多通道)移液器时，确保尖端牢固地安装在移液器上。将移液管尖端(注满要注射的化合物)放置到所需的端口，并将尖端倾斜到非常小的角度(<5°)。不要把针尖完全塞进孔里。
港口布局
XF24 TPort Layout
  • 将A/D加载指南平放于检测药筒顶部。定位装载指南，使字母“A”位于左上角。在加载过程中，用指尖握住加载指南的外缘以保持稳定，这样移液管尖端不会移开加载指南。
  • 使用一个10 - 100μL多通道移液器，确保顶端牢固地安装在移液器上。将移液管针尖(填充用于注射的化合物)放置在加载指南中所需的列中，并将针尖倾斜很小的角度。在没有阻力的情况下，尽量将针尖插入小孔中，然后分配化合物。不要把针尖完全塞进孔里。
  • 将尖端保持45°角。将尖端置于注射口的一半，尖端的斜角对着注射口的对面壁。
  • 不要将针尖完全插入注射端口的底部，因为这可能会导致化合物通过端口泄漏。
  • 按如下图所示的板/组布局，将适当的20 μL注射液轻轻滴入端口。在整个过程中，小心地从端口中取出针尖，使装入指南保持稳定。避免产生气泡。不要轻拍滤芯的任何部分以减少气泡。这可能会导致溶液从注入口泄漏。
  • 将55 μL适当的注射溶液按如下所示的板/组布局轻轻滴入端口，这取决于所进行的检测。小心地从端口中取出针尖。避免产生气泡，但不要轻拍墨盒的任何部分以减少气泡。这可能会导致溶液从注入口泄漏。
  • 按如下图所示的板/组布局，将适当的20 μL注射液轻轻滴入端口。小心地从端口中取出针尖，在整个过程中稳定药筒。避免产生气泡。不要轻拍滤芯的任何部分以减少气泡。这可能会导致溶液从注入口泄漏。
  • 取下A/D端口加载板，替换为B/C端口加载板，左上角有“B”字样。重复上述步骤加载端口B，使用22 μ l注射溶液。
  • 重复上述步骤加载端口B，使用62 μ l注射溶液。
  • 重复上述步骤加载端口B，使用22 μ l注射溶液。
  • 目视检查注射口是否均匀加载。液体应该在端口，确保没有残留滴在药筒顶部。

细胞密度滴定试验的注射口装载

注射端口和体积的XF实时ATP速率测定试剂盒-细胞特征
港口及小区 体积 10倍(港口) (完井)
A港寡霉素 20µl 55µl 15µM 1.5µM
鱼藤酮+抗霉素A 22µl 62µl 5µM 0.5µM
井终浓度(μM) FCCP集团 井 港口/卷(μL)
Oligo / FCCP 1.0 / 1.0 1.0μM A1-D6(所有) A / 55

FCCP浓度滴定试验的注射端口负载

如果进行不同类型的XF检测，请参考相应的XF试剂盒用户指南和以下说明，了解适用于多种注射溶液的适当加载方法。

  • 定位安捷伦海马XF化验188bet博金宝官方网站药筒。将行标签(字母A-H)放到左边。三角形缺口将在左下角。
  • 定位安捷伦海马XF化验188bet博金宝官方网站药筒。将行标签(字母A-D)放到左边。三角形缺口将在左下角。
  • 定位安捷伦海马XF化验188bet博金宝官方网站药筒。将行标签(字母A-D)放到左边。三角形缺口将在左下角。
  • 将A/D加载指南平放于检测药筒顶部。定位装载指南，使字母“A”位于左上角。在加载过程中，用指尖握住加载指南的外缘以保持稳定，这样移液管尖端不会移开加载指南。
  • 使用10-100μl多通道移液器时，确保顶端牢固地安装在移液器上。将移液管针尖(填充用于注射的化合物)放置在加载指南中所需的列中，并将针尖倾斜很小的角度。在没有阻力的情况下，尽量将针尖插入小孔中，然后分配化合物。不要把针尖完全塞进孔里。
  • 使用多通道移液器时，要确保吸管的尖端牢固地安装在移液器上。将移液管尖端(注满需要注射的化合物)置于45°角。将尖端置于注射口的一半，尖端的斜角对着注射口的对面壁。
  • 不要将针尖完全插入注射端口的底部，因为这可能会导致化合物通过端口泄漏。
  • 将化合物轻轻滴入端口。小心地从端口中取出针尖，在整个过程中稳定加载导轨．
港口布局
XF24端口布局
  • 将化合物轻轻滴入端口。小心地从端口中取出针尖，在整个过程中稳定加载导轨．
  • 避免产生气泡，但不要轻拍墨盒的任何部分以减少气泡。这可能会导致化合物从注入口泄漏。
  • 切换到B/C加载指南。用字母“B”在左上角定位。重复步骤3-5中对'B'， 'C'和'D'注入端口所述的加载程序，使用适当的加载导轨。拆卸和丢弃装载导轨。
  • 重复上述步骤中概述的'B'， 'C'和'D'注入端口加载程序。
  • 目视检查注射口是否均匀加载。液体应该在端口，确保没有残留滴在药筒顶部。

注射的一般信息和指南

  • 推荐注射量为20 ~ 30 μL。
  • 推荐进样量为50 μL ~ 100 μL。
  • 推荐的注射溶液体积为注射后稀释10倍，从180 μL的微量板孔开始:
    • 端口A: 20 μL
    • 端口B: 22 μL
    • 端口C: 25 μL
    • 端口D: 28 μL
  • 推荐注射溶液体积为注射后稀释10倍，从500 μL检测培养基的微孔板开始:
    • 端口A: 55 μL
    • 端口B: 62 μL
    • 端口C: 69 μL
    • 端口D: 75 μL
  • 所使用的端口的组成、顺序和数量取决于你的分析设计。
  • 不建议使用自动移液管装药筒，因为它们可能导致注射溶液通过端口孔泄漏。

相关支援资料

参考资料

海马工具包

的信息海马

更换仪器类型

4.运行XF测试

本节重点介绍在分析仪上使用XF实时ATP速率分析进行初始细胞特性描述。

本节侧重于使用分析仪上的细胞能量表型测试来执行初始细胞特征。

本节重点介绍在XF HS迷你分析仪上使用XF实时ATP速率分析进行初始细胞表征。有关执行检测的更详细信息，请参阅XF HS迷你用户指南。

重要事项-在开始XF试验之前

  • 目视检查注射口是否均匀加载。液体应该在端口内，确保传感器盒顶部没有残留滴液。
  • 在显微镜下观察细胞:
    • 确认细胞健康、形态、播种均匀性和纯度(无污染)。
    • 为贴壁细胞，确保细胞与一致的单层粘附，并在洗涤步骤中不被冲走。
    • 为悬浮细胞，确保细胞在离心、洗涤和孵育后稳定粘附。
    • 确保你的背景井不包含细胞。

运行试验的程序

  1. 进入，确保XFe分析仪已上电并连接到XFe控制器(计算机)。您可以在Wave Controller软件左下角的小部件面板中验证仪器连接状态。
小部件面板
  1. 双击从Templates视图打开所需的分析模板文件。如果您的分析模板没有显示在Templates视图中，请使用共享网络驱动器或USB闪存驱动器传输模板。
XFe96模板选择图标
XFe24模板选择图标
  1. 在查看组定义、板图布局和仪器协议后，单击开始运行．
检查并运行
检查并运行
  1. 在您输入结果文件的保存位置后(检测完成后)，XFe分析仪上的托盘门将打开。

    重要!开始校准前，请确保:

    • 传感器盒正确地安装在实用板上。
    • 从传感器墨盒上取下盖子。
    • 传感器盒在公用板上的正确定位(方向)
  1. 当提示时，将传感器盒(水合并装入化合物)和公用板放在托盘上。
  1. 新闻我准备好了启动传感器盒校准。

    完成校准的时间约为10-20分钟(用于37°C的测定)。对于在其他37°C温度下进行的XF测定，将额外增加30分钟的预校准时间，以确保准确的数据采集。

    一旦传感器盒校准完成，波控制器将显示测压元件板对话框。
负载实用板提示
  1. 点击打开托盘弹出实用板并将单元板加载到托盘上。在这一步中，传感器盒保持在XFe分析仪内部。

    重要!在加载电池板之前，请确保:

    • 从电池板上取下盖子。
    • 电池板在托盘上的正确方向。
校准完成的测压元件板
  1. 将细胞板放在托盘上后，单击测压元件板开始平衡。平衡完成后，检测将自动开始获取基线测量值(如仪器协议中所述)。
测压元件板提示
  1. 一旦仪器协议中最后的测量命令完成，波控制器软件将显示卸载传感器滤芯对话框。
开始试验
  1. 点击喷射当准备弹出传感器墨盒和电池板。如有必要，请留作以后的分析(例如，细胞计数归一化)。
完整弹射筒
  1. 在拆卸传感器盒和电池板后，将试验完成将出现对话框。

    点击查看结果要立即打开检测结果文件，或单击波家返回Templates视图并开始另一个XFe分析。
试验完成
  1. 将分析结果文件保存或传输到共享的网络驱动器或USB驱动器，并使用PC上的Wave Desktop软件打开进行数据分析。

的第2章Wave用户指南了解XFe分析仪分析操作的完整细节，包括如何在分析过程中添加/删除测量值，XFe分析在37°C以外的温度下的环境条件，等等。

运行试验的程序

  1. 一旦所有所需的注射端口被填满，将药筒和实用板转移到分析仪并开始药筒校准。

    重要!开始校准前，请确保:

    • 传感器盒正确地安装在实用板上。
    • 从传感器墨盒上取下盖子。
    • 传感器盒在公用板上的正确定位(方向)
  2. 当药盒校准完成后，按照软件提示将实用板换成细胞培养板，并启动XF检测。

    重要!在加载电池板之前，请确保:

    • 从电池板上取下盖子。
    • 电池板在托盘上的正确方向。
  3. 当您的检测完成时，弹出传感器盒和细胞培养板，如有必要，留作后续分析(例如，细胞计数归一化)。
  4. 将XFd结果文件保存或传输到共享的网络驱动器或USB驱动器，并在PC上使用Wave Desktop软件打开，以便分析分析数据。

运行试验的程序

  1. 在XFp Analyzer主屏幕上，点击开始显示可用的分析模板列表。
XFp开始屏幕
XFp模板选择

若“本地”页签中没有对应的模板，可通过共享网络驱动器或u盘打开或传输模板文件。

  1. 在XF HS Mini分析仪主页视图上，触摸开始显示可用的分析模板列表。
XF HS开始屏幕
XF HS模板选择

若“本地”页签中没有对应的模板，可通过共享网络驱动器或u盘打开或传输模板文件。

  1. 点击打开检测模板，查看模板设计:
    1. 组定义-触摸组名称可显示所选组的注射策略、预处理和细胞类型信息。XFp Analyzer软件不允许修改组定义，必须使用Wave Desktop软件。
    2. 板块地图-改变一个井分配给一个组，先触摸组的名字，然后触摸板地图上的井。
  2. 点击列表中的模板，打开并查看组定义和板块地图布局:
    1. 组定义-触摸组名显示所选组的注射策略、预处理、检测介质和细胞类型。可以使用安捷伦海马分析中的修改功能对组定义进行修改。188bet博金宝官方网站
    2. 板块地图-要更改分配给板块地图上一个井的组，首先从列表中触摸组名，然后触摸板块地图上的井。
XFp组定义
XF HS板图
  1. 触摸右箭头(右下角)查看或编辑仪器协议
    • 要从仪器协议中添加或删除测量周期，首先触摸协议步骤，然后使用加减按钮调整测量周期。
  1. 触摸协议在XF HS Mini显示器顶部的色带中查看或编辑仪器协议。
    • 要添加或删除测量周期，首先触摸协议命令，然后使用加减按钮来调整测量周期的数量。
仪器协议
XFp协议
  1. 触摸右箭头(右下角)查看或编辑仪器协议。
    1. 新闻编辑旁边试验名称自定义分析结果文件的名称。
    2. 新闻编辑旁边笔记添加与您的试验相关的自定义注释。
    3. 新闻编辑旁边电子邮件通知通知接收者进行用户交互(例如-用细胞板替换实用板)，并在检测完成后自动发送检测结果文件。此功能需要XFp Analyzer上的活动internet连接。
  1. 触摸回顾并运行在XF HS Mini显示屏顶部的彩带中:
    1. 编辑分析结果文件名称。
    2. 添加有关试验的说明。
    3. 查看警报通知。
    4. 当需要用户交互时，输入电子邮件地址以接收XF HS迷你分析仪的自动通知，并在检测完成时输入检测结果文件的副本。此功能需要一个活跃的internet连接。
XFp审查
XFp运行
  1. 当准备开始XF检测时，单击开始试验．
  1. 当提示时，将传感器盒(水合并装有化合物)和公用板放在托盘上。

    重要!在加载电池板之前，请确保:

    • 传感器盒正确地安装在实用板上。
    • 从传感器墨盒上取下盖子。
    • 传感器盒在公用板上的正确定位(方向)
XFp装盒
  1. 触摸开始运行当你准备开始你的XF试验。
    1. 按照屏幕提示加载校准实用板和传感器盒(水合并装入用于注射的化合物)。

      重要!开始校准前，请验证:

      • 传感器盒正确地安装在校准实用板上。
      • 传感器盒盖已被拆除。
      • 传感器盒+校准实用板正确定位在托盘上。

      新闻关闭托盘当准备开始校准。

    XF HS运行时加载板对话框
    XF HS运行时校准传感器
    1. 一旦校准完成，XFp分析仪托盘将打开并呈现实用板。拆下公用板，将电池板装到托盘上。

      重要!在加载电池板之前，请确保:

      • 从电池板上取下盖子。
      • 电池板在托盘上的正确方向。
    XFp测压元件板

    新闻继续当准备好开始试验时。

    1. 一旦校准完成，按打开托盘显示校准实用板。取下校准公用板，将电池板放在托盘上。

      重要!在加载细胞板开始检测之前，请验证:

      • 电池板盖已被拆除。
      • 传感器盒+校准实用板正确定位在托盘上。
    XF HS运行时测压元件板
    XF HS运行时测压元件板步骤2
    1. 将细胞板放在托盘上后，触摸继续开始平衡。平衡完成后，检测将自动开始获取基线测量值(如仪器协议中所述)。
    1. 试验的第一步叫做平衡。一旦平衡完成，分析仪将开始获取第一个基线测量(在仪器协议中定义)。在视图中心的数据显示上方，您可以看到仪表协议中当前和已完成的命令。
    XFp概述运行时
    XFp运行时注入
    1. 一旦仪器协议中最后的测量命令完成，就可以使用删除板而且墨盒将出现对话框。点击继续弹出传感器盒和电池板。如有必要，请留作以后的分析(例如，细胞计数归一化)。
    XFp删除后期和墨盒
    1. 一旦仪器协议中的最终测量完成，按下喷射从XF HS Mini中弹出传感器盒和电池板。当托盘完全弹出时，从托盘中取出传感器盒和电池板，并在必要时放在一边进行额外的分析(例如-电池计数标准化)。新闻继续关闭托盘。
    XFp运行时弹出墨盒
    XFp动作对话框删除单元格板
    1. 将分析结果文件保存或传输到共享的网络驱动器或USB驱动器，并使用PC上的Wave Desktop软件打开进行数据分析。
    1. 选择一个位置(USB或网络)保存您的分析结果文件和其他数据文件格式的XF HS Mini，然后单击好吧．登录您的海马的分析并上传您的XF HS Mini分析结果文件进行数据分析。
    XFp保存结果
    XFp动作对话框保存化验结果

    相关支援资料

    海马工具包

    的信息海马

    更换仪器类型

    5.分析XF测定结果

    在分析XF检测结果部分，您将学习如何使用安捷伦188bet博金宝官方网站海马的分析用于基本数据分析。Seahorse Analytics是一款基于web的软件应用程序，提供桌面式的交互性，易于学习的界面，允许您从世界任何地方的任何计算机上分析来自安捷伦海马XFe, XFp和XF HS迷你分析仪的结果数据。188bet博金宝官方网站只要你能上网，你就可以用海马分析分析你的海马数据。

    请注意:对于XF96用户，您必须首先使用Wave Desktop软件将您的遗留数据文件(文件扩展名.xfd)转换为分析结果文件格式。在Seahorse Analytics中无法分析遗留数据文件(.xfd)

    如果您正在寻找Wave桌面和报告生成器的帮助内容，请点击这里．

    选择以下主题了解更多信息:

    5.1概述

    5.2分析视图

    5.3数据类型

    5.4数据显示选项

    5.5出口与共享

    5.1概述

    188bet博金宝官方网站安捷伦海马分析是您海马的数据分析软件分析程序分析仪，使您能够轻松地导入、分析、报告并与您的团队或合作者共享结果。

    安捷伦海马分析公司基本信息:188bet博金宝官方网站

    规范 细节
    用于 数据分析
    海马数据文件兼容性 XFe96检测结果文件
    XFe24检测结果文件
    XFp检测结果文件
    XF HS Mini检测结果文件
    互联网浏览器兼容性 谷歌Chrome
    Safari
    Mozilla Firefox
    微软的优势
    强烈反对使用ie浏览器
    导出选项 Microsoft Excel (.xlsx)
    Graphpad Prism (.pzfx)
    图片文件(.JPG及.PNG)

    熟悉海马分析用户界面

    家的观点:

    注册和/或登录您的海马分析帐户后，您将发现自己在首页查看(如下图)。回到首页查看，单击首页按钮，位于深蓝色导航带的左上角。

    1. 上的数据文件列表首页View显示您从文件共享中导入、编辑和/或接受的最近五(5)个文件。
    2. 在文件列表下面，您将看到My Analyzers，在这里您可以将一个或多个Seahorse XF Analyzers分配到您的配置文件。
    3. 方法导入数据文件首页查看，点击小文件上传按钮在文件列表上方的右上角。
    SHA主页视图

    文件视图:

    单击文件按钮在应用程序顶部的深蓝色带的左上角，显示您已导入到您的海马分析帐户的所有数据文件。

    1. 在左边文件视图中，您将看到为帐户创建的任何自定义文件夹。
    2. 文件列表和附带的文件元数据(即最后修改日期，仪器类型等)显示在文件视图。
    3. 在Files视图的右上角，您将看到文件上传按钮，允许您将数据文件导入到您的帐户。你会发现创建文件夹按钮，该按钮将创建一个新的自定义文件夹，您可以将数据文件分配给该文件夹。你还会找到一个搜索字段，该字段允许您对帐户中的数据文件执行关键字搜索。搜索功能在文件名、类别、最后修改日期和乐器类型中查找关键字匹配。
    视图SHA文件视图

    资源视图:

    点击资源在顶级深蓝色带中访问常用资源的集合，以支持您的安捷伦海马XF检测工作流程，以及安捷伦细胞分析支持团队的联系信息。188bet博金宝官方网站

    资源视图

    设置和用户信息:

    点击小用户帐户图标位于深蓝色顶部导航栏的右上角，用于管理您的用户帐号信息，或登出。

    单击设置和用户数据链接显示帐户管理选项，包括:

    1. 检查用于存储数据文件的空闲空间量、查看安捷伦隐私政策或删除您的海马分析帐户。188bet博金宝官方网站
    2. 重命名或删除自定义分析视图。
    3. 更改您的海马分析帐户密码。
    用户信息
    管理你的帐户
    管理你的帐户
    管理你的帐户

    通知:

    点击小贝尔图标在深蓝色顶部导航栏的右上角显示您的帐户通知。当有人与您共享数据文件，或者您与其他用户共享的文件已被接受时，通知会告诉您。通知铃图标将显示一个小的红色数字，对应于您拥有的待处理通知的数量。请参阅分享部分获取有关如何共享和接受数据文件的详细信息。

    通知

    帮助:

    单击问号单击深蓝色顶部导航栏右上角的图标，显示基本帮助信息。单击“帮助”按钮时，显示的帮助信息与软件当前界面有关。有关分析视图的详细信息，请单击帮助按钮，同时处于分析视图上。有关文件管理功能的详细信息，请单击帮助按钮，当您在文件视图。

    帮助

    如何导入数据文件

    有两种方法可以将数据文件输入您的帐户:(1)手动导入数据文件或(2)接受与您共享的数据文件。您可以将数据文件从首页而且文件在两个视图的文件列表上方的右上角使用File Upload按钮查看。

    1. 单击文件上传按钮，显示文件上传对话框(如图所示)。
      1. 单击选择一个文件文本浏览到您的数据文件，或者如果您有文件资源管理器打开您的数据文件，您可以拖放文件到这个区域。
      2. 同时导入一个或多个数据文件时，显示已选择2个数据文件进行导入。
      3. 选择要保存数据文件的自定义文件夹，而不是主文件列表。导入数据文件后，始终可以将其移动到自定义文件夹。
      4. 通过键入新类别或单击类别字段以显示现有类别标签，将类别标签分配给数据文件。
    文件导入
    1. 点击进口
    2. 海马分析将确认文件导入成功。当您关闭此对话框时，您将看到导入的文件首先显示在文件列表中。
    文件导入

    其他文件管理功能

    在您帐户中的每个文件的右侧，您会注意到一个小的3点图标(如下图所示)。

    附加功能菜单

    单击此3点按钮可显示附加文件功能的菜单，包括:

    1. 发送到:显示共享对话框，输入要将所选文件发送到的电子邮件地址。
    2. 删除:从您的帐户中删除所选文件。
    3. 类别:添加或删除类别标签。
    4. 复制一份:创建所选文件的副本。
    5. 重命名:重命名所选文件。
    6. 移动到文件夹:将选定的文件移动到自定义文件夹。
    7. 导出到Excel和GraphPad Prism:从选定的分析结果文件导出数据到Microsoft Excel或GraphPad Prism文件。
    8. 下载:将所选文件下载到您的PC。
    附加功能菜单

    相关支援资料

    参考资料

    5.2分析视图

    海马分析分析视图是单个页面中的小部件(图形)的集合。有3种不同的分析视图类别-标准分析视图、自定义分析视图和分析试剂盒配套分析视图。

    • 的标准分析视图包含基本的小部件选项，如动力学图、散点图和柱状图，用于查看特定速率测量或一系列速率测量的OCR、ECAR、PER(即动力学图)。
    • 的自定义分析视图列表显示所有自定义分析视图，包含用户选择的定义小部件。任何类型的小部件都可以添加到自定义分析视图中。
    • 的检测试剂盒配套分析视图列表显示了分析视图，其中每个视图上的小部件代表所选安捷伦海马XF检测试剂盒的定义参数。188bet博金宝官方网站检测试剂盒配套分析视图可用于使用各自支持的安捷伦Seahorse XF检测工作流程和协议生成的文件的数据分析。188bet博金宝官方网站

    扩大的观点列表显示应用于分析结果文件的分析视图列表或添加新的分析视图(如下图所示)。

    列表展开视图

    其他要点:

    • 并非所有的XF检测工作流程都可以使用Seahorse Analytics进行分析。您可以将结果数据导出到Microsoft Excel或GraphPad Prism以满足自定义分析需求。
    • 每个小部件都有自己的板图，用于控制该小部件的图形数据。要编辑图形化数据，请通过双击小部件打开小部件编辑器视图。使用图上方色带中所示的功能和图右侧的板图控制图形数据。要进行文件级更改，请执行修改视图。
    • 有时您希望对检测结果文件做一些小的修改。，可以从任何分析视图中访问修改功能修改按钮在色带的右上角。更改文件使用修改将影响结果文件中的所有小部件/分析视图(即删除异常值井，更改组颜色或重命名组)。

    空白和自定义分析视图

    自定义分析视图特性提供了最终的数据分析灵活性。您可以将任何分析视图保存为自定义视图，但是这个示例向您展示了如何创建自定义分析视图空白视图。下面的一系列步骤还强调了如何使用空白/自定义视图特性自动化分析工作流中的常规步骤，提高工作流的一致性并节省时间。

    1.打开化验结果文件并选择标准图形>空白视图并点击添加视图

    自定义视图步骤1

    2.单击添加小部件中,选择标准图>动力学图并点击添加小部件

    自定义视图步骤2

    3.在小部件编辑器视图，执行以下步骤:

    1. 切换Y1 >级别显示O2水平数据
    2. 转背景校正从
    3. 双击小部件的名称并键入:氧含量数据QC
    自定义视图步骤3

    4.单击反向箭头，返回到分析视图。

    5.单击添加小部件+(如下图动能图)，选择标准图>动力学图并点击添加小部件

    自定义视图步骤4

    6.在小部件编辑器视图，执行以下步骤:

    1. 使用率下拉菜单，选择ECAR
    2. 切换Y1 >级别显示pH值数据
    3. 转背景校正从
    4. 双击小部件的名称并键入:pH Level Data QC
    自定义视图第5步

    7.单击后退箭头返回分析视图。

    自定义视图步骤6

    8.扩大的观点菜单，并单击3-dot按钮在“New View”分析视图名称的右侧。

    自定义视图第7步

    9.点击另存为自定义视图并输入自定义视图名称(例如Data QC view)

    自定义视图第8步

    10.下次导入数据文件进行分析时，您将能够选择您的自定义数据QC视图，从而节省您为每个导入的新文件创建相同的分析文件的时间。

    自定义视图步骤9

    分析试剂盒伴生分析视图

    XF细胞水户压力测试

    在单个分析视图中计算和显示XF Cell Mito应力测试参数:

    1. 在添加视图窗口中，单击检测试剂盒配套视图列表展开选项列表。
    2. 单击XF细胞水户压力测试分析视图显示分析参数小部件。
    3. 重要的是:对于使用4次注射的XF Cell Mito压力测试分析，必须使用小部件上方的下拉菜单识别寡霉素注射，然后才能添加此分析视图。低聚霉素注射液的选择对正确计算测定参数起着关键作用;不正确的寡霉素注射选择将导致不正确的部件计算和图表。
    4. 选择所需的参数小部件(例如，基础呼吸、最大呼吸等)添加到分析视图中。小部件周围的蓝色轮廓表示它已被选中。如果“急性响应”小部件呈灰色，则不能选择该小部件，因为该参数只能在使用急性注射的XF Cell Mito压力测试中计算。
    5. 中的OFF/ON组组列表如有需要，请单击添加视图
    添加分析视图MST

    您还可以将单个XF Cell Mito压力测试测试参数小部件(即备用呼吸容量)添加到现有的分析视图:

    a.单击添加小部件按钮(图右红色部分)。

    窗口按钮SHA

    b.展开XF Cell Mito Stress Test小部件列表，选择所需的小部件并单击Add widget。

    重要的是:对于使用4次注射的XF Cell Mito压力测试分析，在将选定的小部件添加到分析视图之前，必须使用小部件上方的下拉菜单识别寡霉素注射。低聚霉素注射液的选择对正确计算测定参数起着关键作用;不正确的寡霉素注射选择将导致不正确的部件计算和图表。

    添加小部件MST

    下表描述了XF细胞水户应激试验参数计算:

    添加小部件MST
    试验参数 方程
    非线粒体耗氧量 鱼藤酮/抗霉素A注射后的最小速率测量
    基底呼吸 (第一次注射前的最后一次速率测量)-(非线粒体耗氧量)
    最大呼吸 (注射FCCP后的最大速率测量)-(非线粒体耗氧量)
    质子漏 (注射寡霉素后的最小速率测量)-(非线粒体耗氧量)
    atp生成耦合呼吸作用 (注射寡霉素前最后一次速率测量)-(注射寡霉素后最小速率测量)
    备用呼吸量 (最大呼吸)-(基础呼吸)
    备用呼吸量% (最大呼吸)/(基础呼吸)× 100%
    急性反应 (注射寡霉素前最后一次流速测量)-(急性注射前最后一次流速测量)
    耦合效率 (atp生成耦合呼吸)/(基础呼吸)× 100%

    XF基材氧化应力测试

    在一个分析视图中计算和显示XF衬底氧化应力测试参数:

    1. 在添加视图窗口中，单击检测试剂盒配套视图列表展开选项列表。
    2. 单击XF次牛压力测试分析视图显示分析参数小部件。
    3. 选择想要添加到分析视图中的参数小部件。小部件周围的蓝色轮廓表示它已被选中。
    4. 可选:FCCP最大速率下拉菜单允许您选择注射FCCP后的测量点来计算最大呼吸。使用默认选项，海马分析将计算每个组的最大呼吸量;各组之间的最大反应可能不同(即组1最大反应是注射FCCP后的第一次测量，而组2最大反应是注射FCCP后的第三次测量)。
      您还可以选择特定的速率测量来计算最大呼吸，Seahorse Analytics将对每组使用相同的fccp注射速率测量。使用上面的例子，你可以告诉Seahorse Analytics使用特定的fccp注射速率测量来计算所有组的最大响应，而不是计算组内的最大呼吸。
    5. 根据需要在群组列表中关闭/打开群组，然后单击添加视图
    添加分析视图SubOx

    您还可以将单个XF基质氧化应激测试测试参数小部件(即最大呼吸)添加到现有的分析视图:

    a.单击添加小部件按钮(图右红色部分)。

    添加小部件按钮SHA

    b.扩展XF Sub Ox压力测试小部件列表，选择所需的小部件，然后单击添加小部件．

    添加小部件SubOx

    下表描述了XF基材氧化应力测试测定参数计算:

    SubOx生物简介
    试验参数 方程
    基底呼吸 (第一次注射前最后一次速率测量)-(非线粒体耗氧量*)
    最大呼吸 (注射FCCP后的最大速率测量)-(非线粒体耗氧量*)
    急性反应 (注射寡霉素前最后一次流速测量)-(急性注射前最后一次流速测量)
    *非线粒体耗氧 鱼藤酮/抗霉素A注射后的最小速率测量
    请注意:基质氧化应激试验方案与急性注射的XF细胞Mito应激试验方案相同，因此您可以从XF基质氧化应激试验数据文件中选择所需的测定参数，从XF基质氧化应激试验数据文件中获得其他XF细胞Mito应激试验参数(例如质子泄漏，ATP连接OCR，备用呼吸能力和非线粒体OCR等)添加小部件> XF Cell Mito压力测试小部件列表。

    XF细胞能量表型测试

    在单个分析视图中计算和显示XF细胞能量表型测试参数:

    1. 在添加视图窗口中，单击检测试剂盒配套视图列表展开选项列表。
    2. 单击细胞能量表型分析视图显示分析参数小部件。
    3. 选择想要添加到分析视图中的参数小部件。小部件周围的蓝色轮廓表示它已被选中。
    4. 根据需要在群组列表中关闭/打开群组，然后单击添加视图
    添加分析视图CEPT

    您还可以将单个XF细胞能量表型测试检测参数小部件(即代谢潜能)添加到现有的分析视图:

    a.单击Add Widget按钮(如图右侧红色部分)。

    添加小部件按钮SHA

    b.展开XF细胞能量表型测试，选择所需的小部件，单击“添加小部件”。

    添加分析视图CEPT

    下表描述了XF细胞能量表型试验的测定参数计算:

    生物简介
    试验参数 方程
    基线OCR 第一次注射前最后一次OCR率测量
    基线ECAR 第一次注射前最后一次ECAR速率测量
    强调OCR 第一次注射后的最大OCR速率测量
    强调ECAR 第一次注入后的最大ECAR测量值
    代谢潜能(OCR) (应力OCR/基线OCR) × 100%
    代谢潜能(ECAR) (应力ECAR/基线ECAR) × 100%

    实时ATP速率测定

    按照以下步骤在单个分析视图中计算和显示XF实时ATP速率测定参数。请注意，缓冲因子必须正确配置，以将该分析视图和该分析视图中的小部件添加到您的分析结果文件中。

    1. 在添加视图窗口中，单击检测试剂盒配套视图列表展开选项列表。
    2. 单击ATP速率测定分析视图显示分析参数小部件。
    3. 为诱导XF ATP速率测定(在寡霉素和鱼藤酮/抗霉素A标准注射前1或2次注射)，您必须使用小部件上方的下拉菜单来添加此分析视图，以确定寡霉素注射是注射2还是注射3。低聚霉素注射液的选择对正确计算测定参数起着关键作用;不正确的寡霉素注射选择将导致不正确的部件计算和图表。有关这两个工作流程的更多信息，请参阅实时ATP速率测定用户手册．
    4. 选择想要添加到分析视图中的参数小部件。小部件周围的蓝色轮廓表示它已被选中。如果小部件是灰色的，这意味着它们不能被选中，因为分析文件没有计算参数所需的最小注射次数。
    5. 根据需要在群组列表中关闭/打开群组，然后单击添加视图
    分析视图ATP

    您还可以将单个XF ATP速率测定参数小部件(即ATP生产速率基础)添加到现有的分析视图:

    a.单击添加小部件按钮(图右红色部分)。

    添加小部件按钮SHA

    b.扩展XF ATP速率分析小部件列表，选择所需的小部件，然后单击添加小部件．

    重要的是:对于诱导XF ATP率测定(在寡霉素和鱼藤酮/抗霉素A标准注射前1或2次注射)，必须使用小部件上方的下拉菜单确定寡霉素注射是注射2还是注射3，以添加该分析视图。低聚霉素注射液的选择对正确计算测定参数起着关键作用;不正确的寡霉素注射选择将导致不正确的部件计算和图表。

    添加小部件ATP

    下表描述了XF实时ATP速率测定标准和诱导测定工作流程的参数计算:

    ATP生物学简介

    标准XF实时ATP速率测定

    试验参数 方程
    丝裂三磷酸腺苷产生率(基础) [(第一次注射前的最后一次OCR率测量-寡霉素注射后Rot/AA注射前的最小OCR率测量)x 2 x (P/O)]
    glycoATP产量(基础) 第一次注射前最后一次糖铜仪测量
    总ATP产生率(基础) (mitoATP生产速率)+ (glycoATP生产速率)
    XF ATP速率指数(基础) (mitoATP生产速率)/ (glycoATP生产速率)

    诱导XF实时ATP速率测定:

    试验参数 方程
    丝裂三磷酸腺苷产生率(基础) [(第一次注射前的最后一次OCR率测量-寡霉素注射后Rot/AA注射前的最小OCR率测量)x 2 x (P/O)]
    glycoATP产量(基础) 第一次注射前最后一次糖铜仪测量
    总ATP产生率(基础) (mitoATP生产速率)+ (glycoATP生产速率)
    XF ATP速率指数(基础) (mitoATP生产速率)/ (glycoATP生产速率)
    丝裂三磷酸腺苷产生率(诱导) (急性注射后和寡霉素注射前的平均OCR率测量)-(寡霉素注射后和Rot/AA注射前的最小OCR率测量)]x 2 x (P/O)
    glycoATP产量(诱导) 急性注射后和下次注射前glycoATP生产速率测量的平均值。
    总ATP产生率(诱导) mitoATP产生率(诱导)+ glycoATP产生率(诱导)
    ATP速率指数(诱导) mitoATP产生率(诱导)/ glycoATP产生率(诱导)

    XF T细胞活化试验

    在一个分析视图中计算和显示XF T细胞活化试验参数:

    1. 在添加视图窗口中，单击检测试剂盒配套视图列表展开选项列表。
    2. 单击XF T细胞活化试验分析视图显示分析参数小部件。
    3. 检查基线复选框，以计算每个小部件中显示的PER数据作为基准速率测量的百分比(%)，这是注入激活剂之前的最后一次速率测量。有关定量数据，请离开基线复选框未选中以计算PER (pmol/min)为单位。
    4. 确保在模具中选择正确的注射位置激活剂注入下拉菜单。
    5. 选择想要添加到分析视图中的参数小部件。小部件周围的蓝色轮廓表示它已被选中。
    6. 根据需要在群组列表中关闭/打开群组，然后单击添加视图
    T细胞

    您还可以将单个XF T细胞活化分析参数小部件(即最大速率)添加到现有的分析视图:

    a.单击添加小部件按钮(图右红色部分)。

    添加小部件按钮SHA

    b.扩展XF T细胞活化试验，选择所需的小部件，然后单击添加小部件．

    添加小部件T细胞

    下表描述了XF T细胞活化试验的参数计算:

    试验参数 方程
    T细胞活化 PER(质子流出率)数据显示为动力学图
    最大速率 Seahorse Analytics使用非线性最小二乘曲线拟合算法，利用注入活化剂后和注入2-DG前的速率测量数据进行计算。有关此计算方法的详情，请参阅:
    H. J.莫特尔斯基，“指数平台”，GraphPad曲线拟合指南。2020年5月20日访问。https://www.graphpad.com/guides/prism/8/curve-fitting/REG_Exponential-plateau.htm
    T细胞AUC计算
    曲线下面积 在Seahorse Analytics中使用注入活化剂后和注入2-DG前的速率测量数据进行计算。AUC值只包括高于基线的峰值。有关此计算方法的详情，请参阅:
    H. J. Motulsky，“如何:曲线下的面积”，GraphPad统计指南。2020年5月20日访问。https://www.graphpad.com/guides/prism/8/statistics/stat_area_under_the_curve.htm
    T细胞最大反应计算

    糖酵解速率测定

    按照以下步骤计算并在单个分析视图中显示XF糖酵解速率测定参数。请注意，缓冲因子必须正确配置，以将该分析视图和该分析视图中的小部件添加到您的分析结果文件中。

    1. 在添加视图窗口中，单击检测试剂盒配套视图列表展开选项列表。
    2. 单击糖酵解速率测定分析视图显示分析参数小部件。
    3. 为诱导XF糖酵解速率测定(在鱼藤酮/抗霉素A和2- dg标准注射前进行1或2次注射)，在添加此分析视图之前，必须使用小部件上方的下拉菜单识别鱼藤酮/抗霉素A注射液。鱼藤酮/抗霉素a注射剂的选择在正确计算测定参数中起着关键作用;不正确的鱼藤酮/抗霉素a注射选择将导致不正确的部件计算和图形。有关这两个工作流程的更多信息，请参阅糖酵解速率测定用户手册．
    4. 选择想要添加到分析视图中的参数小部件。小部件周围的蓝色轮廓表示它已被选中。如果小部件是灰色的，这意味着它们不能被选中，因为分析文件没有计算参数所需的最小注射次数。
    5. 根据需要在群组列表中关闭/打开群组，然后单击添加视图
    分析视图

    您还可以将单个XF糖酵解速率测定参数小部件(即基础糖酵解)添加到现有的分析视图:

    a.单击添加小部件按钮(图右红色部分)。

    添加小部件按钮SHA

    b.扩展XF糖酵解速率测定小部件列表，选择所需的小部件，然后单击添加小部件．

    重要的是:为诱导XF糖酵解速率测定(在鱼藤酮/抗霉素A和2- dg标准注射前进行1或2次注射)，必须使用小部件上方的下拉菜单识别鱼藤酮/抗霉素A注射，然后才能添加此分析视图。鱼藤酮/抗霉素a注射剂的选择在正确计算测定参数中起着关键作用;不正确的鱼藤酮/抗霉素a注射选择将导致不正确的部件计算和图形。

    添加小部件GRA

    下表描述了标准和诱导分析工作流的XF糖酵解速率测定参数计算:。

    GRA生物简介

    标准XF糖酵解速率测定

    试验参数 方程
    基底糖酵解 第一次注射前最后一次糖铜仪测量
    基础质子流出率(PER)* 第一次注射前最后一次PER测量
    糖酵解的PER百分比(基础) (基础糖酵解)/(基础PER) x 100%
    *表示该参数在Seahorse Analytics中不单独报告，但用于计算其他报告的参数值。

    诱导XF糖酵解速率测定

    试验参数 方程
    基底糖酵解 第一次注射前最后一次糖铜仪测量
    基础质子流出率(PER)* 第一次注射前最后一次PER测量
    糖酵解的PER百分比(基础) (基础糖酵解)/(基础PER) x 100%
    补充糖酵解 Rot/AA注射后glycoPER最大测量值
    诱导糖酵解 诱导试验注射后和Rot/AA注射前糖化铜测量值的平均值
    诱导/ * 诱导试验注射后和下一次注射前PER测量值的平均值
    糖酵解(诱导)% PER (诱导糖酵解)/(诱导PER) × 100%
    *表示该参数在Seahorse Analytics中不单独报告，但用于计算其他报告的参数值。

    编辑小部件中显示的数据

    要为小部件定制数据图，双击小部件打开小部件编辑器视图。有不同的方法可以自定义特定小部件的数据图。重要的是要记住，每个小部件的板块映射都是独立的，这意味着您在小部件编辑器视图上所做的更改将只应用于相应的小部件。

    每个图上面的功能区中的功能提供了特定于该小部件类型的编辑功能，例如更改速率数据类型、打开/关闭归一化切换，或者逐个查看数据而不是按组平均值查看数据。有关这些函数以及如何使用它们的更多信息，请参阅不同的小部件描述。

    小部件编辑器视图-函数

    图右侧的板图允许您从计算和选定小部件类型的图形数据中包含或排除特定的化验井。

    小部件编辑器视图板地图

    小部件下面的组列表显示所选小部件类型的组平均数据和错误数据。您可以双击组名，在小部件图中显示或隐藏该组中的所有数据。在平板图上关闭的化验井不包括在组列表中看到的值中。当一个组被排除在图形数据之外时，该组将显示为灰色，如下图中的“Control”组所示。

    小部件编辑器视图-组列表

    将缓冲因子分配到检测介质和背景孔中

    定义一个通用的分析工作流缓冲因素化验结果文件中的化验介质和背景井。这一信息是计算质子流出率(PER)所必需的，这是在Seahorse Analytics的几个分析试剂盒配套分析视图上的许多小部件中计算和显示的(即XF T细胞活化分析)。尝试向未正确配置缓冲因子的分析结果文件添加分析视图将导致错误消息(如下图所示)。一旦缓冲因子被正确地分配到分析结果文件中的介质和背景井中，就可以打开所需的小部件和/或分析视图。

    定义缓冲因子1

    解决缓冲因子错误的步骤-如果您在向数据文件添加第一个分析视图时看到上图所示的错误，请从下面的步骤1开始。如果您已经在数据文件中打开了一个分析视图，那么从步骤3开始。

    1. 点击好吧关闭错误对话框。
    2. 在添加视图窗口中,选择标准视图>快速视图并选择OCR动态图形小部件。
    1. 在分析视图中，单击修改(应用程序顶部深蓝色带的右上角)。
    定义缓冲因子2
    定义缓冲因子3
    1. 单击分析媒体TAB确认缓冲因子分配到您的分析介质组定义中。如果在这里没有看到缓冲因子值，可以使用媒体类型下拉菜单选择正确188bet博金宝官方网站安捷伦海马XF检测培养基．
      这两个海马XF RPMI而且DMEM培养基， pH值7.4选项将自动为您的介质分配缓冲因子。如果您使用的是自定义分析介质，则需要输入自定义介质的缓冲因子。
    定义缓冲因子4
    1. 单击背景缓冲TAB键确认缓冲因子分配给背景井。如果你查看使用默认BF框确认使用海马XF RPMI而且DMEM介质，pH 7.4并且将自动导入缓冲因子值。如果您使用的是自定义分析介质，则需要输入自定义介质的缓冲因子。
    定义缓冲因子5
    1. 单击组将TAB确定的测定介质分配给每个测定组。
    定义缓冲因子6
    1. 完成后点击保存．一旦您执行了(或纠正了)上面的步骤，您应该能够将您的分析视图(或小部件)添加到数据文件中。如果在执行这些步骤后仍然看到“您需要为媒体或背景组定义缓冲因子”，请通过以下方式联系安捷伦细胞分析支持:188bet博金宝官方网站cellanalysis.support@188bet博金宝官方网站agilent.com

    相关支援资料

    参考资料

    5.3数据类型

    细胞耗氧(呼吸)和质子排泄(糖酵解)引起细胞外氧和质子浓度的快速、容易测量的变化。188bet博金宝官方网站安捷伦海马XF分析仪可实时测量细胞外氧和质子浓度的变化。使用海马的分析，你可轻松查阅及查阅以下各类资料:

    率数据

    速率数据是所有海马XF分析仪的主要输出。在Seahorse Analytics中计算和报告的3种速率数据类型是:

    耗氧量(OCR):样品在孔中耗氧量的定量测量，从而测量细胞和线粒体呼吸随时间的变化。报告单位为皮摩尔/分钟(pmol/min) vs.时间。显示OCR (Oxygen Consumption Rate)数据率模式(图右)。方法将动态图形添加到分析视图时添加小部件函数时，默认显示的速率为OCR。

    OCR速率数据

    重要!对于未涂布的细胞板，推荐的一般OCR数据范围为:

    1. 背景井:0±20 (pmol/min)在37°C
    2. 试验井:20 - 16050 - 400(pmol/min)在37°C进行基线测量。

    请注意，这些值是一般的推荐值，可能会根据分析的方法和/或细胞类型而有所不同。

    细胞外酸化率(ECAR):质子在细胞外介质中挤压时间的定性测量，报告为毫ph /分钟(mpH/min) vs.时间。细胞外酸化速率(ECAR)数据显示在率模式(图右)。您可以使用以下命令在动态图形小部件编辑器视图上显示ECAR数据率动态图上方的下拉菜单控件。

    ECAR费率数据

    重要!对于未涂布的细胞板，ECAR数据的一般范围为:

    1. 背景井:0±10 (mpH/min)在37°C
    2. 试验井:10 - 9020 - 120(mpH/min)在37°C进行基线测量。

    请注意，这些值是一般的推荐值，可能会根据分析的方法和/或细胞类型而有所不同。

    质子流出率(PER):细胞外酸化的定量测量，说明介质缓冲能力和平板几何。以皮摩尔/分钟(pmol/min)与时间为单位。仅适用于运行后的化验结果分析。在分析运行时不计算PER。可以在动态图形小部件编辑器视图上显示PER数据率动态图上方的下拉菜单控件。

    PER费率数据

    水平数据

    Level Data用于计算速率数据并用于数据质量评估——通常是XF分析工作流的第一步。

    氧浓度(O2毫米汞柱张力):当细胞(或其他生物材料)在速率测量周期中消耗氧气时，测定介质中的氧气浓度将下降。氧浓度的降低被用来计算耗氧率(OCR in pmol/min)。通过切换，可以在动力学图小部件编辑器视图上显示氧张力水平数据水平为日元在动力学图的上方。氧张力(O2)数据显示为mmHg vs.时间(见右图)。

    定义缓冲因子2

    重要!建议检查氧张力(O2)每个检测结果文件的水平数据。使用未涂布的细胞板启动时建议氧张力(O2)水平数据是:

    1. 背景井:152±10 (mmHg/min)， 37°C
    2. 试验井:152±10 (mmHg/min)， 37°C
    3. 在测量周期结束时，氧张力不应低于20 [mmHg]
    4. 下一个测量周期开始时的氧张力应等效于前一次测量的起始氧张力。

    请注意，这些值是一般的推荐值，可能会根据分析的方法和/或细胞类型而有所不同。

    质子浓度(pH):当细胞(或其他生物材料)在速率测量周期中挤压质子时，检测介质中的质子浓度将增加。在整个XF实验中测量微室中的质子浓度，并计算细胞外酸化率(ECAR in mpH/min)。首先选择，可以在动力学图小部件编辑器视图上显示质子浓度水平数据ECAR使用率下拉菜单，然后切换水平为日元．使用上面的动力学图控件。质子浓度(pH)数据显示为pH与时间(图右)。

    定义缓冲因子2

    重要!建议检查每个化验结果文件的质子浓度(pH)水平数据。使用无涂层的细胞板，以及188bet博金宝官方网站安捷伦海马XF DMEM或XF RPMI培养基，pH 7.4,开始推荐的质子浓度(pH值)数据范围是:

    1. 背景井:7.4±0.1 [pH]在37°C
    2. 试验井:7.4±0.1 [pH]在37°C
    3. 测量周期结束时，pH值不应低于pH 6.4
    4. 下一个测量周期开始时的pH值应与前一次测量的起始pH值相等。

    请注意，这些值是一般的推荐值，可能会根据分析的方法和/或细胞类型而有所不同。

    相关支援资料

    参考资料

    5.4数据显示选项

    188bet博金宝官方网站安捷伦海马分析提供了一种图表类型来分析和解释分析结果数据根据关于首选的分析视图类型。有关创建和自定义分析视图的更多信息，请参见分析视图部分。

    小部件类型

    动态图

    动力学图是显示XF结果数据的最常用方法，其中x轴是时间(以分钟为单位)，y轴是测量的分析物浓度的变化率(O2或H +)。可以在动态图形小部件的y轴上显示的两种数据类型是(1)率数据-如耗氧量(OCR)、细胞外酸化(ECAR)、质子流出(PER)和(2)水平数据-氧张力(mmHg)或质子浓度[mpH]。

    添加一个动态图形小部件:

    使用标准图表>>条形图小部件创建所选速率类型(OCR, ECAR, PER)和测量的柱状图。

    ，可以将动态图形小部件添加到Seahorse Analytics中的任何分析视图添加小部件按钮(图右红色)和选择动态图(可在标准图形列表)。

    DAdd小部件按钮SHA
    动态图形小部件

    注意:还有几个专门的动力学图，您可以添加到一个自定义视图，专门用于分析XF实时ATP速率分析结果数据- mitoATP生产速率，glycoATP生产速率和总ATP生产速率。您可以通过单击找到这些小部件添加小部件控件的小部件选项列表ATP速率测定(图右)。有关这些动力学图中计算的数据的更多信息，请查看此白皮书．

    ATP动力学图

    条形图

    条形图是另一种常用的显示XF数据的方法，可以帮助用户进行常规XF分析，例如确定最佳的FCCP浓度和细胞播种密度。Seahorse Analytics提供了各种各样的柱状图选项，可以添加到分析视图中，其中许多是特定于分析的。有关特定柱状图小部件的更多信息，请参阅此处或海马分析中的特定分析试剂盒伴生分析视图。

    添加条形图小部件:

    使用标准图表>>条形图小部件创建所选速率类型(OCR, ECAR, PER)和测量的柱状图。

    例如，要显示所有组的速率测量10的OCR数据:

    1. 单击添加小部件按钮
    2. 扩大标准图形列表
    3. 选择条形图
    4. 点击添加小部件
    标准图形条形图

    在小部件编辑器视图上，使用率下拉菜单选择速率测量10，然后单击后退箭头(小部件编辑器视图的左上角)返回到分析视图。

    标准图形条形图

    能量图

    能量图小部件是X和Y散点图，允许对所有或选定组的选定速率测量的两种类型的速率数据进行比较。除了下面描述的能量图小部件外，还有几个额外的散点图小部件选项可以添加到分析视图中，这些选项依赖于分析类型，并在分析视图部分中定义。

    • 添加一个能量地图小部件:

      使用标准图表>>能量图小部件在y轴上创建耗氧率数据(OCR)的散点图，x轴上是酸化率数据(ECAR或PER)，描绘了在所选速率测量中每个组的相对通路利用率。

      使用测量下拉菜单显示组数据的另一个速率测量在化验。
      使用率下拉菜单，将x轴上的酸化率更改为PER(或ECAR);OCR总是显示在y轴上。
    能源地图插件SHA

    能量图(基础)

    能量地图(基础)数据小部件可在XF ATP速率测定小部件列表中找到，可用于分析安捷伦海马XF实时ATP速率测定的标准工作流和诱导工作流。188bet博金宝官方网站有关这两个工作流程的更多信息，请参阅实时ATP速率测定用户手册．还请注意，缓冲因子必须正确分配到分析介质、背景井和分析组，以计算该小部件数据。

    的能量地图(基础)小部件y轴表示基础有丝分裂三磷酸腺苷生产速率，x轴表示基础糖蛋白生产速率(如下图所示)。的详细信息中可以找到此小部件使用的计算添加小部件对话(图右)。

    能量映射基础ATP部件

    对于超过2次注射的XF ATP Rate分析，在将该小部件添加到分析视图之前，必须使用添加小部件(图右)上的下拉菜单识别寡霉素注射。为什么?这种寡霉素注射剂的选择在计算你将在小部件上看到的正确的基础ATP生产速率时起着关键作用。寡霉素注射液的不正确选择将导致不正确的计算和数据。

    能量地图基础ATP细节

    能量图(诱导)

    能量地图(诱导)数据小部件也可以在XF ATP速率测定小部件列表中找到，但只能应用于安捷伦海马XF实时ATP速率测定的诱导测定工作流。188bet博金宝官方网站有关诱导分析工作流程的更多信息，请参阅实时ATP速率测定用户手册．还请注意，在计算此小部件数据之前，缓冲因子必须正确分配到检测介质、背景井和检测组。

    的精力充沛的地图(诱导)小部件y轴表示诱导mitoATP的生成速率，x轴表示诱导glycoATP的生成速率(见右图)。的详细信息中可以找到此小部件使用的计算添加小部件对话(如下图所示)。

    高能地图诱导ATP小部件

    对于3+次注射的XF ATP速率分析，在将该小部件添加到分析视图之前，必须使用添加小部件(图右)上的下拉菜单识别寡霉素注射液。为什么?寡霉素注射剂的选择在计算你将在小部件上看到的正确的诱导ATP产生率中起着关键作用。寡霉素注射液的不正确选择将导致不正确的计算和数据。

    高能图谱诱导ATP细节

    细胞能量表型

    XF Cell能量表现型数据小部件可以在XF Cell能量表现型小部件列表中找到，用于分析XF Cell能量表现型测试数据。

    与Seahorse Analytics中的其他散点图小部件选项相比，这是一个独特的小部件，因为它每组绘制2个数据点-基线表型和应激表型，由称为代谢潜能的虚线连接- y轴总是OCR, x轴总是ECAR(如下图所示)。

    有关此小部件中执行的计算的详细信息，请参见“添加小部件详细信息”显示或XF细胞能量表型检测试剂盒用户手册．

    能源表型小部件

    除了动力学图、柱状图和散点图小部件外，Seahorse Analytics还提供了两个额外的小部件，这些小部件是标准和/或诱导XF实时ATP速率检测工作流程所独有的。有关这两个工作流程的更多信息，请参阅实时ATP速率测定用户手册．还请注意，在计算此小部件数据之前，缓冲因子必须正确分配到检测介质、背景井和检测组。

    堆叠柱状图

    堆叠柱状图小部件目前可以在XF ATP速率分析小部件列表中找到。的ATP产生率(基础)widget为每组创建了一个基础糖蛋白生产速率(上面的蓝色条)和基础丝核三磷酸腺苷生产速率(下面的红色条)的堆叠柱状图(如下图所示，左)。此小部件适用于标准和诱导分析工作流程。

    的ATP产生率(诱导)widget创建了一个堆叠柱状图的平均诱导glycoATP生产率(上面的蓝色条)和平均诱导mitoATP生产率(下面的红色条)为每组(如下图所示，右)。此小部件仅适用于诱导分析工作流。

    基础ATP堆叠柱状图
    诱导ATP堆叠柱状图

    XF ATP速率指数

    XF ATP速率指数目前可以在XF ATP速率分析小部件列表中找到。XF ATP速率指数小部件绘制基础有丝分裂ATP生成率与基础糖蛋白生成率的比值作为空圆圈标记，并绘制诱导有丝分裂ATP生成率的平均值与诱导糖蛋白生成率的平均值的比值作为填充圆圈标记(仅当应用于诱导试验结果文件时-下图小部件显示了诱导XF ATP速率试验的数据)。还请注意，在计算此小部件数据之前，缓冲因子必须正确分配到检测介质、背景井和检测组。

    XF ATP速率测试小部件

    相关支援资料

    参考资料

    5.5出口与共享

    将数据导出到Microsoft Excel或GraphPad Prism文件，或直接使用Seahorse Analytics与合作伙伴共享结果数据和见解。

    数据导出

    有几种方法可以将Seahorse Analytics的数据导出到Microsoft Excel、GraphPad Prism或图像文件。

    导出所有费率数据

    您可以为所选文件创建一个包含所有速率数据的Excel和Prism文件。此导出将不包括您在分析视图中计算的任何参数计算(例如备用呼吸容量)，您将需要从每个小部件单独导出该数据。

    附加功能菜单

    如何导出所有费率数据:

    1. 去文件或首页视图。
    2. 单击文件列右侧的3点按钮以显示菜单。
    3. 点击导出到Excel或出口到Prism创建所需的文件。
    4. 使用导出到Excel而且出口到Prism菜单下为单个文件找到的选项首页而且文件视图(绿色高亮部分，如图右)。
    附加功能菜单

    如何使用这个导出特性?这种类型的数据导出允许用户轻松地将所有速率数据(OCR, ECAR和PER)数据传输到Prism或Excel中，以创建高质量或定制的数字，执行统计分析，以及Seahorse Analytics中没有提供的其他分析功能。

    从小部件导出选择数据

    您可以将单个小部件数据导出到包含所选小部件数据的Excel和Prism文件。导出文件中的数据将与您格式化小部件的方式完全匹配。例如，如果配置一个小部件以在井模式下显示基础呼吸，Prism导出文件将包含每个组的基础呼吸数据的单个井值。如果将小部件配置为在组模式下显示基础呼吸，Prism导出文件将显示组平均值和误差值，而不是单个井的值。

    小部件导出个人

    如何导出所有费率数据:

    1. 在任何分析视图或小部件编辑器视图中，寻找小部件右上角的小云按钮。
    2. 将鼠标光标移到云按钮上以显示图像而且数据导出选项。
    3. 移动光标图像将小部件导出为PNG或JPG文件，或者数据将小部件导出为Excel或Prism文件。
    4. 导出文件中的数据将与您格式化小部件的方式完全匹配。在本例中，Prism导出文件包含板上两组每口井的基础呼吸值。
    部件输出棱镜

    如何使用这个导出特性?这种类型的数据导出允许用户轻松地将选择的速率或参数数据导出为图像文件，或Prism或Excel文件。Prism和Excel导出允许您获得您想要进一步分析的确切数据(即创建高质量或自定义图形，执行统计分析，以及Seahorse Analytics中没有提供的其他分析功能)，而不是导出所有数据并试图找到您需要的特定信息。

    文件共享

    您可以与合作者或您的团队共享单独的分析结果文件文件共享特性。的分享在每个检测结果文件右侧的小3点菜单下可以找到特征首页而且文件视图(图右)。

    共享数据附加功能菜单

    点击发送到若要弹出对话框，请输入收件人的电子邮件地址，单击发送发送您的数据文件。如果收件人没有Seahorse Analytics帐户，则必须创建一个帐户才能查看数据文件。如果收件人有帐户，他们将收到一封电子邮件，通知他们文件已与他们共享。他们还会在Seahorse Analytics(右上角的铃铛图标)中看到一个通知，在那里他们将接受(或拒绝)共享文件。

    发送到对话框

    这个共享特性是如何使用的?共享功能允许您直接通过应用程序将分析结果文件发送给有或没有海马分析帐户的人。您选择共享的分析结果文件将在收件人的帐户中创建该数据文件的副本，小部件布局、选择和分析视图将按照您在文件共享之前格式化它们的方式显示。收件人可以对共享文件进行修改，但您的文件副本将保持不变。

    相关支援资料

    参考资料

    海马工具包

    的信息海马

    更换仪器类型

    本节主要介绍使用Wave Desktop和Report Generator软件查看和分析分析结果数据。

    波桌面是任何XF, XFe和XFp分析仪生成的结果文件的数据分析软件。利用Wave Desktop灵活的分析视图、嵌入式报告工具和其他强大的分析功能，将复杂的细胞代谢数据转换为可发布的结果。

    XF报告生成器是微软Excel宏文件，自动计算每个海马XF化验试剂盒的参数，并在一页，可定制的摘要报告中显示结果数据。

    选择以下主题了解更多信息:

    5.1 PC规格和兼容性

    5.2数据类型

    5.3数据显示选项

    5.4分析视图

    5.5 XF报表生成器

    5.1 PC规格和兼容性

    Wave Desktop是所有海马分析仪的分析设计和数据分析软件，支持:

    • 分析所有海马分析仪(XFe96, XFe24, XFp, XF96和XF24)的数据文件。
    • 为XFe96, XFe24和XFp分析仪创建和定制分析模板。
    • 导出数据到(1)Microsoft Excel， (2) GraphPad Prism或(3)XF报表生成器。
    • 支持Windows和Macintosh pc的Microsoft Excel(32 & 64位)。

    总是鼓励更新到最新版本的Wave Desktop软件．Wave Desktop软件的最新版本是2.6.1版(2019年4月)。Wave Desktop软件可以安装在任何装有Windows 7或更高版本操作系统的PC上。

    下面是Wave Desktop 2.6软件的PC规格和兼容性细节:

    电脑 规范
    Windows电脑 操作系统:Windows 7、8.1和10
    处理器:英特尔酷睿i3(或更高版本)
    硬盘空间:175 GB
    系统内存:4gb(最小*)
    屏幕分辨率:1280 x 800(最低)
    支持的Excel版本:2010、2013和2016年
    Macintosh电脑(需要使用虚拟机) 操作系统:Mac OSx 10.11或更高版本
    虚拟机:Parallels 12和Windows 7、8.1和10
    处理器:英特尔酷睿i3(或更高版本)
    硬盘空间:175 GB
    系统内存:4gb(最小*)
    屏幕分辨率:1280 x 800(最低)
    支持的Excel版本:2011 & 2016

    *为了获得最佳的软件体验，建议使用8gb(或更高)系统内存(RAM)。

    相关支援资料

    参考资料

    5.2数据类型

    细胞耗氧(呼吸作用)和质子排泄(糖酵解作用)引起溶解氧和游离质子浓度的快速、容易测量的变化。188bet博金宝官方网站安捷伦Seahorse XF分析仪通过在微孔板内的单层细胞上分离极小体积(约2 μL)的介质，实时测量溶解氧和自由质子的浓度，然后分别计算OCR和ECAR。

    使用Wave桌面软件，您可以轻松查阅这些数据:

    速率数据是XF分析仪的主要输出。

    耗氧量(OCR):孔中耗氧量的定量测量，线粒体呼吸的指标，报告在皮摩尔/分钟(pmol/min)与时间。

    耗氧率(OCR)数据显示在率模式(右)

    OCR速率数据

    细胞外酸化率(ECAR):细胞外介质中质子挤压的定性测量，报告为毫ph /分钟(mpH/min) vs.时间。

    细胞外酸化速率(ECAR)数据显示在率模式(右)

    ECAR费率数据

    质子流出率(PER):细胞外酸化的定量测量，说明介质缓冲能力和平板几何。以皮摩尔/分钟(pmol/min)与时间为单位。仅在运行后的测试结果中可用，在测试运行时不可用。

    PER费率数据

    参见手册第3章Wave用户指南有关Wave软件中可用数据类型的更多信息。

    电平数据用于计算速率数据，也可用于诊断目的。

    氧浓度(mmHg):当细胞(或其他生物材料)在测量过程中消耗氧气时，氧张力会降低。氧张力的降低被用来计算耗氧率(OCR)。上查看氧张力水平数据概述使用Y1下拉菜单进入分析视图。

    氧张力(O2)数据显示为mmHg vs. time in水平模式(右)

    O2水平数据

    质子浓度(mpH)当细胞(或其他生物材料)在测量过程中产生质子时，质子浓度会增加。在整个XF实验中测量微室中自由质子的浓度，并计算为细胞外酸化率(ECAR)。您可以使用Y1下拉菜单在Overview分析视图中查看mpH级别数据。

    质子浓度(mpH)数据显示在水平模式(右)

    Ph值数据

    相关支援资料

    参考资料

    5.3数据显示选项

    Wave提供了一组标准的图形选项来查看和解释分析结果数据。根据所选择的分析视图类型，Wave会自动计算并将结果数据绘制为以下之一:

    动态图

    动态图是显示XF分析仪的速率数据的最常用方法。动力学图在y轴上显示速率，在x轴上显示时间。在实验过程中，数据被采集并实时绘制成动态图。动态图形可以在Wave软件中的快速视图和概述分析视图中找到。

    OCR动力学图

    能量图

    绘制XF结果数据的另一种常用方法是能量图(散点图)，其中耗氧率(OCR)始终绘制在y轴上，酸化数据(ECAR或PER)始终绘制在x轴上。使用“测量”下拉菜单选择要显示在每个组的能量图上的速率测量。使用Rate下拉菜单将x轴速率更改为PER。能量图选项可以在Quick View和OCR vs. ECAR分析视图中找到。

    散点图

    板图

    平板图显示了每个测定井的选定速率测量数据。在运行分析时，平板图总是显示在Wave的右上角，以及在快速视图、概述和OCR vs. ECAR分析视图上。“快速视图”有一个按钮来显示车牌地图，默认情况下是隐藏的。

    的板图在快速视图而且OCR vs. ECAR分析视图显示两个速率:耗氧率(OCR -顶部)和酸化数据(ECAR或PER -底部)。的板图在概述分析视图显示1个速率- OCR, ECAR或PER。

    板图

    打开一个新的分析视图时，板图默认情况下显示速率测量1的数据。使用“速率”下拉菜单可显示在分析期间进行另一个速率测量的数据。

    条形图

    的条形图可在概述仅分析视图(在Plate Map下面)，并显示所选测量的每个组的平均速率。使用显示下拉菜单，将速率显示由“组”(平均)模式改为“井”(单井)模式。

    的条形图可用于识别异常值、最佳FCCP浓度、最佳细胞播种密度或其他在测量数据绘制为动力学图或散点图时可能不明显的趋势。

    条形图

    组列表

    的组列表在动力学图或散点图中绘制的数据的图例。

    组列表

    使用组列表:

    • 通过双击组名，从图形化数据中隐藏或显示组。
    • 检查细节单击“分组列表”右上角的框，显示分组统计信息。所选速率测量的统计数据显示为平均值和误差。选择不同的速率度量以显示该速率的组统计信息。
    • 已翻转的化验井从在板块地图上不包括在计算组统计。
    • 当一个组被隐藏时，该组的均值和标准差为:均值:0.00;标准差:0:00。

    参见手册第3章Wave用户指南有关Wave软件中可用数据类型的更多信息。

    相关支援资料

    参考资料

    5.4分析视图

    在Wave Desktop中，有4个可自定义的分析视图可以添加到分析结果文件中。方法将每个分析视图多次添加到分析结果文件中添加视图按钮在顶级功能区菜单。

    快速视图

    快速视图打开新的分析结果文件时显示的默认分析视图。快速视图同时显示OCR与时间的动力学图，ECAR与时间的动力学图，以及OCR与ECAR的能量图。

    快速视图

    概述

    概述显示速率(OCR, ECAR, PER或PPR)与时间的关系。选择的速率显示在y轴上，和时间显示在x轴上。每个测量的组统计数据(平均率和误差)可以通过检查细节方框中组列表在动力学图下面。概述是Wave软件中最通用的分析视图，用于日常分析功能。来显示概述,点击添加视图并选择概述从视图列表中。

    提示:通过重复的过程添加多个Overview分析视图添加视图>概述．这为裁剪结果数据表示提供了更大的灵活性，以显示特定的组、响应或组之间的比较。

    概述分析视图

    OCR vs. ECAR

    OCR vs. ECAR属性显示能量图光学字符识别在y轴和(默认情况下)ECAR在x轴上。使用Rate下拉菜单可以将x轴上显示的速率更改为任意一个每或PPR．OCR始终显示在y轴上，不能更改。来显示OCR vs. ECAR,点击添加视图并选择OCR vs. ECAR从视图列表中。

    OCR vs ECAR分析视图

    数据

    的数据视图包含与分析结果文件相关的所有数据，分为7个选项卡:

    • 组数据:每组的平均速率数据(OCR, ECAR, PER或PPR)和误差，按测量次数排序。
    • 率:单个井速数据(OCR, ECAR, PER或PPR)按测量次数排序。错误值不显示。
    • 数据层:单井位数据(O2和pH值)，按测量次数排序。
    • 生:原始测量数据，包括O2和pH值光发射值、参考值、井和环境温度记录每次测量。此选项卡最常由技术支持人员使用，而不是用于常规数据分析。
    • 校准:O2pH值校准结果由井组织。
    • 校准的观点:每个实验的O2和pH校准结果显示为平板图。
    • 事件日志:分析信息，如分析仪序列号，软件版本，板和条形码批号，以及在分析过程中的其他设置。还提供了XF测试期间使用的协议命令的可排序表，包括命令名、计时和结果。

    显示数据视图中,单击添加视图并选择数据从视图列表中。“组数据”选项卡默认显示数据视图。

    数据分析视图

    参见手册的第3章Wave用户指南有关每个分析视图的更详细信息，包括重新计算基线数据的百分比，将速率数据归一化为生物学参数(即细胞数)，在平板图上标记分析孔，以及其他关键分析功能和特性。

    相关支援资料

    参考资料

    5.5 XF报表生成器

    188bet博金宝官方网站Agilent Seahorse XF Report generator是Microsoft Excel宏文件，可自动计算每个Seahorse XF Assay Kit的参数，并在一页可定制的摘要报告中显示结果数据。

    Wave提供了一键式直接导出结果数据到XF报表生成器，任何在Wave中对结果数据的修改，如排除的化验井或归一化率数据，将被合并到导出和分析的报表生成器Excel文件中。单击出口按钮，以显示可用的XF报表生成器导出选项的列表。

    为什么使用XF报表生成器?

    • 更高效和一致的数据分析-将原始动力学数据转换为可解释的结果，并消除重复的人工计算和数据缩减。
    • 在几秒钟内总结XF结果数据-数据以有组织的、可定制的、易于理解的报告形式呈现。
    • 可扩展以满足您的分析需求-使用多文件XF报告生成器一次性导入和分析多达5个复制结果文件。
    • 更简单的协作—无需任何特殊软件程序或许可，即可在报表生成器中审查和重新分析结果数据。
    • 支持分析:
      • 海马XFe, XF和XFp分析仪生成的数据文件。
      • Windows pc上的Excel 2010、2013和2016。
      • Excel适用于Mac 2011年和苹果电脑2016年。
    XF报告生成器-下载页面 单文件分析 多文件分析
    海马XF细胞能量表型试验 单文件用户指南 多文件用户指南
    海马XF细胞水户压力测试 单文件用户指南 多文件用户指南
    海马XF实时ATP速率测定 单文件用户指南 不可用
    海马XF糖酵解速率测定 单文件用户指南 多文件用户指南
    海马XF水户燃料弯曲测试 单文件用户指南 不可用
    海马XF糖酵解应激试验 单文件用户指南 不可用

    相关支援资料

    参考资料

    海马工具包

    的信息海马

    更换仪器类型

    6.超越基础

    XF学习中心的这一部分将介绍使用XF分析仪的各种主题，包括一系列XF检测试剂盒和应用，替代检测条件和样品类型，以及XF数据的规范化和分析。

    选择以下主题了解更多信息:

    6.1 XF套件和应用

    6.2标准化解决方案

    6.2脂肪酸氧化

    6.3渗透细胞和Iso Mitos

    6.3渗透细胞和Iso Mitos

    6.4缺氧和球状体

    6.4缺氧与胰岛

    6.1 XF测定和应用

    188bet博金宝官方网站安捷伦XF检测试剂盒和试剂是专门为每个XF分析仪开发的，以确保结果的可靠性和一致性。Seahorse XF试剂盒和试剂通过提供预校准，预测试试剂来测量有价值的功能代谢参数，包括细胞ATP生成率，线粒体功能，糖酵解活性和活细胞，渗透细胞和分离线粒体中的底物氧化，帮助简化XF检测的运行。

    以下材料提供了执行广泛的XF测定的信息和方法。

    细胞ATP生成

    线粒体功能

    线粒体底物氧化

    糖酵解作用

    免疫细胞激活实验

    线粒体底物偏好

    代谢表型出现

    6.2标准化解决方案

    无论是比较不同的细胞类型、基因修饰还是复合处理，功能生物学数据的规范化都是执行XF测定和/或后续XF数据分析和解释工作流程中的关键组成部分。标准化的XF分析可以应用在几个水平，包括细胞数量，基因组DNA，和总细胞蛋白。

    下面的材料提供了关于规范化XF数据的方法的信息。

    6.3渗透细胞和分离线粒体

    线粒体功能的研究是临床和基础科学研究的核心。安捷伦海188bet博金宝官方网站马XF细胞水渡压力测试提供了一个初步的线粒体生物能量剖面。然而，检查驱动观察到的变化的精确酶或途径可以提供额外的见解，并进一步将代谢酶的特定改变与疾病状态联系起来。

    研究底物氧化的传统方法涉及分离线粒体，XF分析仪支持高通量分析，其中能量需求和底物可用性可以严格控制，以使用最小数量的分离线粒体进行机制研究。

    然而，在分离线粒体时存在一些缺点，包括数量有限和分离过程中线粒体的亚选择或损伤引起的偏差。XF质膜渗透剂(PMP)在粘附细胞的质膜上形成气孔，而不会对线粒体膜造成任何伴随损伤。这种试剂克服了与使用分离的线粒体或含有完整细胞的底物补充介质相关的挑战。

    Permeabilized细胞

    孤立的线粒体

    6.4缺氧和球状体

    6.4缺氧与胰岛

    分析仪具有在低氧环境(缺氧)中测量代谢的能力，以及某些类型的三维样品，包括胰岛。分析仪能够测量低氧环境(缺氧)下的代谢，以及某些类型的三维样品，包括球体。分析仪具有在低氧环境(缺氧)中测量新陈代谢的能力。

    缺氧

    球状体

    小岛

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