为什么比例总是100%?
绝对OCR (pmol/min)值根据各自的定义和数学运算转换为依赖关系、容量和灵活性的%值。因此,理论上对单一燃料的最大依赖将是100%。
我的依赖值加起来应该是100%吗?
如果一个细胞对替代燃料有一定的灵活性,它可以通过氧化来满足能量需求,那么对所有燃料的依赖性就不会等于100%。
如果我有负的灵活性值,这意味着什么?
当OCR变化很小时,井与井之间的可变性可能会导致负的灵活性值。小于5%的负弹性值通常归因于试验中的噪声。如果您发现明显的负面灵活性,请联系技术支持:cellanalysis.support@188bet博金宝官方网站agilent.com
如果这三种抑制剂只导致总OCR的小幅下降呢?
除了这三种燃料的氧化过程外,其他过程也可能导致基线OCR。这些过程可以进一步分解为线粒体耗氧过程和非线粒体耗氧过程:
- 其他线粒体呼吸:依赖于替代底物被氧化以支持线粒体呼吸的呼吸,包括(但不限于)短链和中链脂肪酸和谷氨酰胺以外的氨基酸。
- 非线粒体耗氧:细胞内其他生化过程对氧气的消耗。这包括(但不限于)在过氧化物酶体和其他消耗氧气的细胞酶过程中被部分氧化的长链脂肪酸。总耗氧量的非线粒体部分可以使用海马XF细胞水藤应激测试来测量。
如何删除报表生成器中的异常井?
在报表生成器中的数据分析之前,必须删除异常值。有关更多信息,请参见排除异常值一节。
我无法将我的数据以Excel文件的形式导入到报表生成器中进行分析,为什么?
分析结果数据必须以Excel工作簿文件格式(*.xlsx)从Wave(桌面或控制器)或XFp 1.1软件导出,然后才能导入任何报告生成器。如果Excel文件已从Wave中导出,但无法导入到报表生成器中,请联系Seahorse技术支持:cellanalysis.support@188bet博金宝官方网站agilent.com
如果您收到关于仪器协议(XFe96;XFe24;XF96;XF24唯一的)
将数据导入报表生成器时出现的错误可能是由custom周期在仪器协议中。一个自定义周期指仪器协议中额外的“混合”或“等待”命令步骤。自定义周期不是XF细胞能量表型测试的标准化分析模板的一部分,在报告生成器分析中不支持。如果您对自定义周期有任何其他问题,请联系海马技术支持。
如何在此报表生成器中组合多个结果文件?
XF水户燃料Flex测试报告生成器可以分析单个分析结果文件。目前不支持在报表生成器中组合多个结果文件。
用什么比率来计算依赖性、灵活性和容量?
用于计算的费率在第4页说明。基线速率定义为第一次注入前的最后一次速率测量。Dependency和Capacity rate定义为NEXT注入前的LAST速率度量。有关XF水户燃料Flex测试报告生成器中的计算的更多信息,请参阅参数计算。
这些抑制剂和浓度对所有细胞都有效吗?
是的,该测试使用这三种化合物的浓度远高于它们的EC50值来抑制哺乳动物细胞。这些值已在许多细胞系和初级分离株中得到验证。虽然大多数细胞类型或细胞系对至少一种抑制剂有明显的反应,但并非所有细胞都会对所有抑制剂有反应。如果细胞对特定的抑制剂没有反应,它们可能不依赖于特定的燃料途径(即,它们对于用于氧化磷酸化的燃料是灵活的)。
在本实验中如何解释ECAR和糖酵解?
由于细胞ATP生产和需求的变化,使用抑制剂的组合可能会混淆ECAR数据的解释。为了直接测量糖酵解功能,我们建议使用海马XF糖酵解压力测试。
推荐的检测介质不含脂肪酸;我可以加进去吗?
虽然不是必需的,但可以在培养基中加入长链脂肪酸。我们建议在测试外源性脂肪酸氧化时使用单一种长链脂肪酸,如海马XF棕榈酸- bsa FAO底物。注意:只有长链脂肪酸的氧化,如棕榈酸,对依莫辛的抑制敏感。
更多常见问题:小区分析常见问题解答和故障排除
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